[發明專利]轉移因子口服液的分子量分布測試方法

無效

• 申請號: 201310033767.X
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103115982A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 龔立冬;邵娜;李彧娜;崔愛艷;徐香
• 申請（專利權）人: 蘇州賽分科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明特別涉及一種用于對轉移因子口服液的分子量分布進行測試的方法。

背景技術

轉移因子（TF）又稱傳輸因子，由具有細胞性免疫功能的淋巴細胞產生，作為一種特定的細胞因子參與機體的免疫反應，能提高動物機體細胞免疫功能，促進機體抗感染和防御能力。轉移因子口服液是以口服為給藥形式的免疫增強劑。轉移因子屬多肽類物質，是由多核苷酸、多肽及其它成份組成的復合分子。其中小分子肽類物質的分子量小于5000D，是轉移因子的功能標示物，并作為其主要功效成份。當前轉移因子中不同分子量多肽的結構研究成為熱點，通過對小分子多肽的分子量和結構研究，對進一步的了解多肽與其功能活性之間的關系具有重要意義。

迄今為止，已有較多關于以高效液相色譜法對轉移因子口服液中游離氨基酸、防腐劑和抑菌劑等進行檢測的報道，但對于其中小分子多肽分子量分布的研究則較少見諸報道。

近來，有研究人員采用Follin-酚法（Lowry）對轉移因子中多肽含量進行了測定，但該檢測方法只能對樣品中總多肽含量進行測定，無法對不同小分子多肽進行分離后測定，亦無法知道多肽的分子量信息。

又及，雖然曾有研究人員以反相高效液相色譜方法對多肽類物質進行了檢測，其主要是基于多肽類物質的疏水性，在不同介質條件下將不同多肽分子進行分離，該方法主要采用有機相作為檢測流動相，但由于疏水性不同的小分子多肽在有機相中的溶解性存在差異，導致檢測結果出現較大偏差。

發明內容

本發明的目的在于提出一種轉移因子口服液的分子量分布測試方法，其能夠實現對轉移因子口服液中多肽分子量信息的準確測定，從而克服現有技術中的不足。

為實現上述發明目的，本發明采用了如下技術方案：

一種轉移因子口服液的分子量分布測試方法，包括：

依據轉移因子口服液中所含小分子多肽的情況，建立色譜檢測條件；

利用所述色譜檢測條件對至少三種選定標準樣品進行測定，建立相應的標準圖譜，并由標準圖譜中分子的保留時間與分子量對數值之間存在的線性關系，實現對未知小分子多肽的分子量測算；

以及，利用所述色譜檢測條件對與轉移因子口服液樣品進行檢測，并依據檢測結果及標準圖譜，實現對轉移因子口服液樣品中小分子多肽分子量分布的測定。

進一步的，所述標準樣品可包括牛血清白蛋白、核糖核酸酶A和尿嘧啶，但不限于此。

作為較為優選的實施方案之一，所述色譜檢測條件包括：采用水溶性體積排阻色譜柱。

作為較為優選的具體應用方案之一，所述水溶性體積排阻色譜柱可選用蘇州賽分科技有限公司生產的Zenix-C?SEC?100型色譜柱或類似產品，但不限于此。

所述色譜檢測條件還包括：

采用pH值為6.5-7.5的，濃度為50-200?mM的磷酸鹽緩沖液作為流動相，且流速為0.6-1.2?mL/min.

所述色譜檢測條件還包括：將檢測波長設于210～280?nm。

所述色譜檢測條件還可包括：將柱溫控制為室溫。

所述小分子多肽的分子量的對數值Y與小分子多肽在色譜柱中的保留時間X之間的線性關系具體為：

Y=?-0.475X?+?7.4804。

又及，所述小分子多肽的分子量的對數值Y與小分子多肽在色譜柱中的保留時間X之間的線性關系中相關系數R²=0.9991。

與現有技術相比，本發明的優點至少在于：采用高效液相體積排阻色譜法測定轉移因子口服液中小分子多肽的分子量，方法簡單，易于操作，且能夠實現對轉移因子口服液中多肽分子量信息的準確測定。

附圖說明

圖1系本發明一較佳實施方案中牛血清白蛋白、核糖核酸酶A和尿嘧啶分子量標準品色譜圖。

圖2系本發明一較佳實施方案中牛血清白蛋白、核糖核酸酶A和尿嘧啶分子量對數與保留時間標準曲線圖。

圖3系本發明一較佳實施方案中轉移因子口服液中小分子多肽分子量檢測圖譜；

圖4系本發明實施例1中一種轉移因子口服液樣品中小分子多肽分子量檢測圖譜；

圖5系本發明實施例2中一種轉移因子口服液樣品中小分子多肽分子量檢測圖譜。

具體實施方式