[發(fā)明專利]一種指導(dǎo)5-氟尿嘧啶用藥的多重基因檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310033261.9
• 申請(qǐng)日: 2013-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN103074436A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 南麗;顏進(jìn);王晴晴;吳勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海爾施生物醫(yī)藥股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種指導(dǎo)5-氟尿嘧啶用藥的多重基因檢測(cè)試劑盒，包括超純水，X溶液，10×PCR緩沖液，PCR引物，25mM氯化鎂溶液，DNA聚合酶和陽性對(duì)照品，其特征在于所述的PCR引物包括以下6個(gè)與5-氟尿嘧啶用藥相關(guān)基因上的7個(gè)SNP位點(diǎn)上的不同基因型的正反向擴(kuò)增引物、DNA內(nèi)參的正反向擴(kuò)增引物及反應(yīng)內(nèi)參的正反向擴(kuò)增引物，其核酸序列如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種指導(dǎo)5-氟尿嘧啶用藥的多重基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述的X溶液為包括三磷酸脫氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向擴(kuò)增引物序列為AGGTGACACTATAGAATA；反向擴(kuò)增引物序列為GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向擴(kuò)增引物帶熒光標(biāo)記。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種指導(dǎo)5-氟尿嘧啶用藥的多重基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述的陽性對(duì)照品為上述6個(gè)與5-氟尿嘧啶用藥相關(guān)基因上的7個(gè)SNP位點(diǎn)上的不同基因型的引物克隆所得DNA片段。

4.一種利用權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的指導(dǎo)5-氟尿嘧啶用藥的多重基因檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于具體包括以下步驟：

（1）采集樣本并提取核酸

采集腫瘤患者口腔拭子或血液樣品，從中提取核酸；

（2）以提取的核酸為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)

取DNA樣品2μL，10×PCR緩沖液2μL，25mM的氯化鎂3.4μL，PCR引物溶液2μL，DNA聚合酶0.6μL，X溶液2μL，超純水10μL混勻后加入到96孔樣品板上進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件：95°C1分鐘；94°C30秒鐘，60°C30秒鐘，70°C1分鐘，循環(huán)35次；70°C1分鐘；4°C直至收取PCR產(chǎn)物；其中所述的X溶液為包括三磷酸脫氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向擴(kuò)增引物序列為AGGTGACACTATAGAATA；反向擴(kuò)增引物序列為GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向擴(kuò)增引物帶熒光標(biāo)記；PCR引物溶液中各PCR引物濃度均為200nM，所述的PCR引物包括以下6個(gè)與5-氟尿嘧啶用藥相關(guān)基因上的7個(gè)SNP位點(diǎn)上的不同基因型的正反向擴(kuò)增引物、DNA內(nèi)參的正反向擴(kuò)增引物及反應(yīng)內(nèi)參的正反向擴(kuò)增引物，基因序列如序列表中SEQ?ID?NO.1～NO.32所示；

（3）GeXP遺傳分析儀毛細(xì)電泳分離樣品

取PCR產(chǎn)物0.1-1μL，Beckman?GeXP系統(tǒng)配套的上樣緩沖液38.75μL，DNA標(biāo)準(zhǔn)品0.5μL，礦物油一滴混合均勻后加入到96孔分離液板上進(jìn)行毛細(xì)電泳分離樣品，將GeXP遺傳分析儀的軟件獲得的圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，獲得指導(dǎo)5-氟尿嘧啶用藥相關(guān)基因的SNP位點(diǎn)的等位基因型。