[發(fā)明專(zhuān)利]一種快速檢測(cè)船舶壓載水中存活單細(xì)胞生物的裝置和方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310032671.1
• 申請(qǐng)日: 2013-01-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103105352A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫野青;宋永欣;彭冉;潘新祥;李冬青
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 大連海事大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N15/14
• 分類(lèi)號(hào): G01N15/14;G01N15/02
• 代理公司: 大連東方專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 21212
• 代理人: 姜玉蓉;李洪福

1.一種快速檢測(cè)船舶壓載水中存活單細(xì)胞生物的裝置，其特征在于，包括PDMS微流控芯片，位于PDMS微流控芯片下方與PDMS微流控芯片封接的玻璃底片G；所述PDMS微流控芯片包括儲(chǔ)液孔A、儲(chǔ)液孔B、儲(chǔ)液孔C、儲(chǔ)液孔D、儲(chǔ)液孔E、主通道（12）、第一聚焦通道（13）、第二聚焦通道（14）、檢測(cè)通道（15）、第一分選通道（16）、第二分選通道（17），儲(chǔ)液孔A與主通道（12）連接，儲(chǔ)液孔B與第一聚焦通道（13）連接，儲(chǔ)液孔C與第二聚焦通道（14）連接，儲(chǔ)液孔D與第一分選通道（16）連接，儲(chǔ)液孔E與第二分選通道（17）連接，第一分選通道（16）、第二分選通道（17）通過(guò)檢測(cè)通道（15）與主通道（12）連接，第一聚焦通道（13）、第二聚焦通道（14）與主通道（12）連接；儲(chǔ)液孔A、儲(chǔ)液孔B、儲(chǔ)液孔C、儲(chǔ)液孔D、儲(chǔ)液孔E中插入鉑電極，儲(chǔ)液孔A中的鉑電極的另一端與直流電源的正極相連，儲(chǔ)液孔E中的鉑電極的另一端通過(guò)電阻R（4）、雙刀雙擲繼電器（3）和電位器（2）連接至直流電源（1）的負(fù)極，儲(chǔ)液孔D的鉑電極的另一端通過(guò)雙刀雙擲繼電器（3）和電位器（2）連接至直流電源（1）的負(fù)極，儲(chǔ)液孔B和儲(chǔ)液孔C中的鉑電極直接與直流電源（1）的負(fù)極相連接，電阻R（4）兩端通過(guò)導(dǎo)線(xiàn)連接至差分放大電路（5）的兩個(gè)輸入端，差分放大電路（5）的輸出端連接至ARM（11）的輸入端；檢測(cè)通道（15）的上方設(shè)置激光發(fā)射探頭（6），激光發(fā)射探頭（6）發(fā)射的激光通過(guò)第一濾光片（7）進(jìn)入檢測(cè)通道（5），在玻璃底片G下方對(duì)著檢測(cè)通道（15）的位置設(shè)置第二濾光片（8），在第二濾光片（8）的下方設(shè)置雪崩探測(cè)器（9），雪崩探測(cè)器（9）的輸出端連接放大電路（10）的輸入端，放大電路（10）的輸出端連接至ARM（11）。

2.一種采用權(quán)利要求1所述的裝置進(jìn)行快速檢測(cè)船舶壓載水中存活單細(xì)胞生物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）樣品提取步驟：從待檢測(cè)的船舶壓載水中提取船舶壓載水樣品；

2）船舶壓載水樣品以及緩沖液滴加步驟：將采用FDA染料染色后的船舶壓載水樣品加入到儲(chǔ)液孔A中；并向儲(chǔ)液孔A、儲(chǔ)液孔B、儲(chǔ)液孔C、儲(chǔ)液孔D、儲(chǔ)液孔E中分別滴加緩沖液；

3）接通直流電源（1）對(duì)儲(chǔ)液孔A中的船舶壓載水樣品進(jìn)行電滲輸運(yùn)；

4）當(dāng)船舶壓載水樣品中沒(méi)有存活單細(xì)胞生物時(shí)，單細(xì)胞生物樣品在電滲流的作用下全部通過(guò)第一分選通道輸送至儲(chǔ)液孔D；

5）當(dāng)船舶壓載水樣品中存在存活單細(xì)胞生物時(shí)，活的單細(xì)胞生物通過(guò)檢測(cè)通道（15）時(shí)，激光發(fā)射探頭（6）發(fā)出的激光對(duì)經(jīng)過(guò)FDA染料染色的帶有熒光的單細(xì)胞生物進(jìn)行激發(fā)，激發(fā)出的熒光信號(hào)經(jīng)過(guò)第一濾光片（7）和第二濾光片（8）進(jìn)入雪崩探測(cè)器（9）進(jìn)行光電信號(hào)轉(zhuǎn)換，從雪崩探測(cè)器（9）輸出的電信號(hào)經(jīng)信號(hào)放大電路（10）放大后發(fā)送至ARM（11），并且發(fā)送至雙刀雙擲繼電器（3）使雙刀雙擲繼電器（3）動(dòng)作，使儲(chǔ)液孔D和儲(chǔ)液孔E的電壓互換，將或的單細(xì)胞生物樣品分選至液壓孔E中，持續(xù)預(yù)設(shè)時(shí)間后結(jié)束雙刀雙擲繼電器的動(dòng)作，使儲(chǔ)液孔D和儲(chǔ)液孔E中的電源恢復(fù)至互換前的數(shù)值；

6）獲得存活單細(xì)胞生物的個(gè)數(shù)以及存活單細(xì)胞生物的大小的檢測(cè)值，存活單細(xì)胞生物的個(gè)數(shù)檢測(cè)值等于熒光脈沖信號(hào)的個(gè)數(shù)；根據(jù)電阻R(4)兩端檢測(cè)到的電壓脈沖信號(hào)的幅值來(lái)判定存活單細(xì)胞生物的大小。