[發明專利]一種雜合抗菌肽LPCB及其制備方法

無效

• 申請號: 201310032156.3
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103145805A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 曹毅;喬代蓉;徐輝
• 申請（專利權）人: 曹毅;喬代蓉;徐輝
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種雜合抗菌肽LPCB，其特征在于：它為以下氨基酸序列：

RRWQWR(P)nKWKIFKKIEK；其中，n表示脯氨酸的個數，n＝1～10。

2.根據權利要求1所述的雜合抗菌肽LPCB，其特征在于：所述雜合抗菌肽LPCB是在CecropinB成熟肽N端加入LfcinB的核心序列設計而成，它所對應的核苷酸序列為：

5-CCCTCGAGAAAAGAAGAAGATGGCAATGGAGA(CCA)nAAGTGGAAGATATTCAAGAAGATAGAGAAGTAATCTAGAGC-3；其中，n表示脯氨酸密碼子的個數，n＝3～30。

3.一種雜合抗菌肽LPCB的制備方法，其特征在于，包括：

雜合抗菌肽LPCB的基因改造及克隆：參照畢赤巴斯德酵母的偏好密碼子，改造并合成雜合抗菌肽Lfcin-P-CecropinB基因，并利用SOE法克隆雜合抗菌肽基因，將正確的基因序列與pPICZα-A相連接獲得表達載體pPICZα-A-LPCB，并通過酶切驗證后送出測序，獲得測序正確的表達載體；

雜合抗菌肽LPCB真核表達載體的構建：將測序正確的表達載體pPICZα-A-LPCB通過電轉化法轉入畢赤巴斯德酵母Pichia?pastoris?X-33，經甲醇誘導表達，獲得雜合抗菌肽LPCB；

其中，在利用SOE法克隆基因過程中，所采用的引物為：

F3：5-CCCTCGAGAAAAGAAGAAGATGGCAATGGAGA(CCA)n₁AAGTGGAAGA-3

F4：5-GCTCTAGATTACTTCTCTATCTTCTTGAATATCTTCCACTT(TGG)n₂TCTCCATTGCC-3

其中，n₁＝n₂＝3～30，n表示脯氨酸密碼子的個數。

4.根據權利要求3所述的雜合抗菌肽LPCB的制備方法，其特征在于，采用甲醇進行誘導表達的條件為：在25℃下，每24～36h向培養基中添加0.2～0.5％的甲醇，誘導表達72～96h，獲得雜合抗菌肽LPCB。