[發明專利]一種基于Fe3O4納米材料免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310032109.9
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103116026A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 張錦勝;彭紅;賴衛華
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種基于Fe₃O₄納米材料免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征步驟如下：

1）檢測目標菌的特異性免疫磁珠的制備；

2）將目標菌特異性單克隆抗體固定在固相載體上；

3）免疫磁珠富集目標菌株并分離：將第1步制得的免疫磁珠加入待檢樣品，充分混合震蕩，抓取目標菌后通過施加外加磁場，則磁珠就匯集到磁場一邊，吸走上清液則可以分離出磁珠，若待檢樣本中有目標菌，則被磁珠所富集，加少量無菌的去離子水則形成目標菌的磁珠懸濁液；

4）將富集的磁珠懸濁液加到固定了單克隆抗體的固相載體上，若存在目標菌則形成雙抗夾心，用無菌的去離子水清洗，則沒有抓取到目標菌的磁珠就被洗掉，若不存在目標菌，則所有磁珠都被洗掉；

5）之后，用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的磁珠洗下來，用外加磁場分離磁珠的方法分離磁珠，用無菌的去離子水清洗掉離子和溶劑，如果還存在磁珠，這部分就是抓到目標菌的磁珠；

6）這部分磁珠，加入分析純的硝酸和硫酸進行硝化反應，使磁珠Fe₃O₄轉變為三價鐵離子和二價鐵離子，采用鄰二氮菲吸光光度法、硫氰酸鉀比色法等可以檢測出鐵離子的量，從而可以算出磁珠的量，通過加標定量磁珠而在一定程度間接定量出目標菌的量。

2.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米材料免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述免疫磁珠為Fe₃O₄材料，表面修飾為葡聚糖、殼聚糖等可被硝化反應的有機高分子，納米磁珠粒徑小于1000納米。

3.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米材料免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述的目標菌最終檢出評價方法是通過分析捕獲目標菌的磁珠Fe₃O₄的量，間接計算目標菌的量。

4.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米材料免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是通過硝化反應，將捕獲目標菌的磁珠轉化成鐵離子，通過檢測出鐵離子的量來定量磁珠量并間接定量目標菌。