[發明專利]一種判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法

有效

• 申請號: 201310031926.2
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103115907A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 駱清銘;張智紅;王亮
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京市德權律師事務所 11302
• 代理人: 劉麗君

1.一種判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將熒光蛋白（FP）與微管相關蛋白1輕鏈3（LC3）蛋白融合，轉染并表達于哺乳動物細胞中；

（2）對步驟（1）得到的哺乳動物細胞進行處理，使哺乳動物細胞內形成熒光蛋白-微管相關蛋白1輕鏈3蛋白（FP-LC3）斑點；

（3）對步驟（2）得到的FP-LC3斑點進行分析，若FP-LC3與哺乳動物細胞胞漿中的FP-LC3存在完全、快速的交換行為，則FP-LC3斑點的類型為蛋白聚集體；若FP-LC3與哺乳動物細胞胞漿中的FP-LC3存在少量或者不存在交換行為，則FP-LC3斑點的類型為自吞噬結構。

2.根據權利要求1所述的判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，分析方法為熒光漂白后恢復（FRAP）方法。

3.根據權利要求1所述的判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法，其特征在于，所述FRAP方法為：對FP-LC3斑點進行FRAP分析，如果檢測FP-LC3斑點的熒光信號的半恢復時間<1s，恢復程度>80%，則表明該FP-LC3斑點是蛋白聚集體。

4.根據權利要求1所述的判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，分析方法為熒光激活后重分布（FRAPa）方法。

5.根據權利要求4所述的判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法，其特征在于，所述FRAPa方法為：對FP-LC3斑點進行FRAPa分析，如果檢測FP-LC3斑點的熒光信號的半衰減時間<2s，衰減程度>60%，則表明該FP-LC3斑點是蛋白聚集體。

6.根據權利要求1所述的判定微管相關蛋白1輕鏈3蛋白斑點類型的方法，其特征在于，所述步驟（3）是利用熒光顯微鏡進行觀察。