[發明專利]基于固定化酶原位高效酶解法的蛋白鑒定及質譜成像的方法

有效

• 申請號: 201310031923.9
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103969321A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 陸豪杰;焦競;張瑩;蔡炎;楊芃原
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/28
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種基于固定化酶原位高效酶解法的蛋白鑒定及質譜成像的方法，其特征是，選用合適的納米材料作為胰蛋白酶吸附劑，利用其高效的酶解效率實現組織切片原位酶解及蛋白鑒定并應用于質譜成像，其包括步驟：

（1）將離體的組織切片用導電膠帶固定于質譜靶板上；

（2）依次用不同濃度的乙醇溶液潤洗切片表面，每次潤洗一分鐘；

（3）將胰蛋白酶與氧化石墨烯材料按照適宜比例，在磷酸緩沖溶液中混合，4攝氏度條件下孵育；

（4）將固定化酶用25mM碳酸氫銨溶液稀釋后均勻鋪展在組織切片上，并放入37攝氏度恒溫箱，至組織切片表面的溶液完全蒸發；

（5）配制含三氟乙酸和乙腈水溶液配制成CHCA基質溶液，用基質覆蓋儀將基質溶液均勻噴灑在組織切片上，待基質完全干燥后送入質譜儀進行成像分析；

（6）將掃描結果導入成像軟件中，通過圖像重構技術處理，選擇合適的肽段得到組織切片中蛋白分布的質譜成像圖。

2.按照權利要求1所述的、方法，其特征是組織切片厚度為14μm。

3.按照權利要求1所述的，其特征是依次用50%，75%，100%的乙醇溶液潤洗切片表面。

4.按照權利要求1所述的方法，其特征是潤洗時間為1分鐘。

5.按照權利要求1所述的方法，其特征是材料與胰蛋白酶的濃度為400ng/μL。

6.按照權利要求1所述的方法，其特征是磷酸緩沖溶液濃度為20mM pH5。

7.按照權利要求1所述的方法，其特征是胰蛋白酶與氧化石墨烯材料混合比例為1:1。

8.按照權利要求1所述的方法，其特征是4攝氏度條件下孵育5分鐘。

9.按照權利要求1所述的方法，其特征是將固定化酶用25mM碳酸氫銨溶液稀釋10倍。

10.按照權利要求1所述的方法，其特征是CHCA基質溶液含5mg/mL,0.1%三氟乙酸50%乙腈，用基質覆蓋儀將基質溶液均勻噴灑在組織切片上。