[發明專利]用于檢測分枝桿菌的引物對和標準品以及它們的應用

有效

• 申請號: 201310031783.5
• 申請日: 2013-01-28
• 公開（公告）號: CN103088139A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 李丹;林怡雯;何苗
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.用于輔助鑒定分枝桿菌的引物對，由序列表的序列2所示的單鏈DNA片段和序列表的序列3所示的單鏈DNA片段組成。

2.權利要求1所述引物對在制備輔助鑒定分枝桿菌的試劑盒中的應用。

3.一種輔助鑒定分枝桿菌的試劑盒，包括權利要求1所述引物對和標準品；所述標準品為序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子或含有序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子的質粒。

4.權利要求1所述引物對和標準品在制備輔助鑒定分枝桿菌的試劑盒中的應用；所述標準品為序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子或含有序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子的質粒。

5.如權利要求3所述的試劑盒或如權利要求4所述的應用，其特征在于：所述含有序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子的質粒為將序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子插入18-T?Vector，得到的重組質粒pMD-18T-hsp65。

6.權利要求1所述引物對在輔助鑒定分枝桿菌中的應用。

7.一種輔助鑒定分枝桿菌的方法，包括如下步驟：以待測細菌的基因組DNA為模板，用權利要求1所述引物對進行PCR擴增，如果得到365±5bp的擴增產物待測細菌為候選的分枝桿菌，如果沒有得到365±5bp的擴增產物待測細菌為候選的非分枝桿菌。

8.權利要求1所述引物對或權利要求3所述試劑盒在定量檢測分枝桿菌中的應用。

9.權利要求1所述引物對或權利要求3所述試劑盒在檢測待測水樣中分枝桿菌的含量中的應用。

10.一種檢測待測水樣中的分枝桿菌含量的方法，包括如下步驟：

（1）按照如下方法制作標準曲線；以所述標準品為模板，采用權利要求1所述特異引物對進行實時熒光定量PCR，以實時熒光定量PCR體系中的標準品的拷貝數和實時熒光定量PCR得到的Ct值制作標準曲線方程；所述標準品為序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子或含有序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子的質粒；

（2）從待測水樣中提取基因組DNA，以基因組DNA為模板，采用權利要求1所述特異引物對進行實時熒光定量PCR，將Ct值代入所述標準曲線方程，得到待測水樣中的分枝桿菌含量。