[發明專利]一種免疫組化用二抗顯色系統靈敏度、親和力的測定方法

有效

• 申請號: 201310031750.0
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103116029A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 林齊心;陳贊烽;熊玉林;王小亞
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/78
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于生物病理檢測領域，具體的，本發明涉及一種免疫組化用二抗顯色系統靈敏度、親和力的測定方法。

背景技術

免疫組化技術是應用抗原抗體反應的基本原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色，來確定、觀察組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量研究的一項技術。其中顯色過程多為標記的第二抗體承擔。免疫組化技術最終要在二抗上面體現，因此二抗的特異性及其靈敏度在一定程度上決定了檢測過程的特異性和靈敏度。如何使抗體能與抗原有效地結合并將此信號進行放大，是衡量免疫組化技術的兩項重要指標。圍繞信號放大這一要求，不斷有新的問世。目前具有代表性的二抗放大系統主要用生物素與親和素系統、高分子葡聚糖載體結合多個二抗和辣根酶系統等。不同公司基于二抗放大產品由于生產的方法不同，其在免疫組化應用中各有差異。如何評價二抗在免疫組化過程中的靈敏度、親和力，對于產品的指標控制十分重要。目前評價的主要方法是通過在病理組織上根據其顯色的深淺進行人為的判定，具有極大的隨意性。本發明提供了一種在玻片上評價二抗顯色系統靈敏度及其親和力的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于免疫組化過程進行二抗顯色系統靈敏度和親和力測定的技術。

隨著免疫組化技術在臨床診斷和腫瘤轉化診斷中的應用，醫院病理工作者對免疫組化靈敏度的要求越來越高。選擇高靈敏度、高親和力、顯色效果明顯的二抗系統，對免疫組化的檢測結果判斷具有重要的作用。本發明中，采用一抗在載玻片上點樣矩陣模型，作為二抗的檢測底物，進行免疫組化二抗顯色系統靈敏度和親和力的測定。

將可以與二抗發生特異性免疫反應的不同濃度的一抗預先在玻片上進行點樣，真空干燥后，加石蠟封閉，然后經過脫蠟、水化、修復、二抗反應、顯色等步驟。或是經過包埋的不同濃度一抗的石蠟切片預先放置在玻片上，經過切片、撈片、烤片、脫蠟、水化、修復、二抗反應、顯色等步驟。將顯色結果進行拍照，采用軟件識別系統對每個點樣點的顯色結果進行計算，獲得其光密度值。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案如下：

一種免疫組化用二抗顯色系統靈敏度、親和力的測定方法，所述測定方法包括下列工藝步驟：將能與二抗發生特異性免疫反應的一抗按不同稀釋的濃度預先吸附在玻片上，一個濃度的一種多肽在玻片上經上樣后形成一個小圓斑；或是將經過包埋的不同濃度的一抗石蠟切片預先放置在玻片上，與病理組織切片同時經歷常規免疫組化操作步驟，以特定一抗的染色結果來判定免疫組化過程二抗顯色系統的靈敏度及親和力。

所述預先吸附在玻片上是以物理吸附的方式，吸附在免疫組化用的玻片上。

所述常規免疫組化操作步驟包括：干燥、石蠟作用、脫蠟、水化、修復、二抗反應、染色。

所述石蠟作用是將一抗點樣在玻片上并干燥后，將玻片加入熔化的石蠟中浸泡，保證點樣位置浸泡于石蠟中，然后將載玻片取出冷卻固化。?

所述一抗的染色結果，是指一抗的斑點顏色從濃度由低到高表現為逐漸加深的現象；再通過顯微鏡對病理組織切片進行觀察，根據病理組織切片上靶位顏色可顯示的最低濃度判定檢測一抗的最低濃度，以確定二抗檢測系統的靈敏度。如某一排一抗點樣濃度的斑點無明顯的顯色反應，而上一濃度的斑點顯色且顏色肉眼可辨，則該濃度的上一濃度的一抗濃度為檢測二抗系統的靈敏度值。

所述以特定一抗的染色結果來判定免疫組化過程二抗顯色系統的靈敏度及親和力的具體方法為：對染色結果進行拍照，用圖像軟件對呈色斑點進行光密度測量，通過對應一抗濃度與光密度，計算二抗檢測系統與一抗的親和力；一抗與二抗結合顯示的光密度值達到飽和值50%時，其一抗的濃度即為該二抗顯色系統的親和力指數，以μg/L表示，通過比較不同來源二抗樣品的親和力指數衡量二抗的親和力高低。