[發(fā)明專利]一種用精液蛋白基因檢測昆蟲卵孵化率的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310031405.7
• 申請日: 2013-01-28
• 公開（公告）號: CN103060465A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒德玉;陳紅印;張禮生;王樹英;陳長風;王孟卿;劉晨曦
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用精液蛋白基因檢測昆蟲卵孵化率的方法。

背景技術(shù)

害蟲生物防治在農(nóng)林業(yè)可持續(xù)發(fā)展中發(fā)揮著不可替代的重要作用。天敵昆蟲的大量生產(chǎn)更是生物防治中最基礎(chǔ)也是最重要的環(huán)節(jié)。捕食性天敵昆蟲蠋蝽（Armachinensis）可以控制來自鱗翅目、鞘翅目、半翅目、同翅目、膜翅目等多種農(nóng)林害蟲，尤其是它還可以控制重大外來入侵害蟲馬鈴薯甲蟲和美國白蛾，因此蠋蝽是一種應(yīng)用前景很好的天敵昆蟲商品。

作為商品，大量減少生產(chǎn)成本是人們追求利潤最大化的一個途徑。在天敵昆蟲蠋蝽生產(chǎn)中就可以應(yīng)用不同的食物來生產(chǎn)蠋蝽，例如，不同的昆蟲獵物、含昆蟲成分的人工飼料和不含昆蟲成分的人工飼料，進而減少生產(chǎn)成本。但是應(yīng)用不同的食物生產(chǎn)出來的蠋蝽的生物學特性參差不齊，有些釋放后能達到很好的控制害蟲的作用，有的則在釋放后效果不顯著。由于不同食物飼喂的蠋蝽在表型上很難區(qū)分，因此這些天敵昆蟲在釋放前是很難評估它們的生物學特性的。

蠋蝽成蟲的卵孵化率是評價天敵昆蟲生物學特性的一個很重要的指標。有較高卵孵化率的蠋蝽種群繁殖快，倍增時間短，可以在短期內(nèi)迅速控制住害蟲。這可以大大減少防治害蟲的成本，增加利潤率。相反，卵孵化率較低的蠋蝽由于卵孵化少、繁殖慢，倍增時間延長，因此控制住害蟲的時間會相對滯后，這就大大增加了防治成本，減少了利潤。目前，對于不同食物來源或不同商家的商品蠋蝽卵孵化率的檢測方法仍舊是在產(chǎn)卵期或人為規(guī)定的時間內(nèi)測試其卵孵化率的多少，這種方法費時費力費錢。因此需要一種快速檢測天敵昆蟲商品生物學特性-卵孵化率的方法。

昆蟲體內(nèi)，精液蛋白(seminal?fluid?protein?CSSFP066)產(chǎn)生于雄蟲附腺中，它可以刺激精子的儲存、延遲精子的替代和競爭、顯著地增加雄蟲的適切性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供用于檢測精液蛋白CSSFP066編碼基因表達量的物質(zhì)用途。

本發(fā)明提供的用于檢測精液蛋白CSSFP066編碼基因表達量的物質(zhì)在檢測昆蟲卵孵化率中的應(yīng)用；

所述精液蛋白CSSFP066的氨基酸序列為序列表中的序列2。

上述應(yīng)用中，所述昆蟲為昆蟲個體或昆蟲種群；

所述昆蟲種群具體為取食不同物質(zhì)昆蟲種群；所述取食不同物質(zhì)昆蟲種群進一步具體為取食人工飼料的昆蟲種群或取食獵物的昆蟲種群；

所述精液蛋白CSSFP066編碼基因的核苷酸序列為序列表中的序列1或序列表中的序列1自5’末端第1-312位核苷酸。

所述昆蟲具體為蠋蝽。

上述人工飼料按照如下方法制備：生豬肝60g、大豆粉10g、水100ml、雞蛋20ml、干酪素2g、蔗糖8g、VC0.2g、氯化膽堿0.4g、泛酸鈣8mg、葉酸0.1mg、煙酰胺0.2mg、慶大霉素3.9mg；具體飼喂方法見實施例2；

上述獵物為柞蠶（Antheraea?pernyi）蛹；具體飼喂方法見實施例2。

上述應(yīng)用中，所述用于檢測精液蛋白CSSFP066編碼基因表達量的物質(zhì)為如下1）-3）中任意一種：

1）引物對A：所述引物對由引物1和引物2組成；所述引物1的核苷酸序列為序列表中序列3；所述引物2的核苷酸序列為序列表中序列4；

2）含有所述引物對A的RT-PCR試劑；

3）含有所述引物對A或所述RT-PCR試劑的試劑盒。

上述應(yīng)用中，所述RT-PCR試劑由水、RT-PCR擴增緩沖液、鎂離子、dNTPs、所述的引物對A、熒光染料和Taq酶組成；

所述引物對A中的各條引物在所述RT-PCR試劑中的終濃度具體為0.2-1μM，所述引物對A中的各條引物在所述RT-PCR試劑中的終濃度進一步具體為0.25μM；

所述試劑盒還包括內(nèi)參引物對B，所述內(nèi)參引物對B由引物3和引物4組成；所述引物3的核苷酸序列為序列表中的序列6；所述引物4的核苷酸序列為序列表中的序列7。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測昆蟲卵孵化率的方法。

本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟：用所述的引物對A或所述的RT-PCR試劑或所述的試劑盒對待測的昆蟲A和B進行RT-PCR擴增；

若所述昆蟲A的精液蛋白CSSFP066基因的表達量高于所述昆蟲B，則所述昆蟲A卵孵化率高于所述昆蟲B。

上述方法中，所述昆蟲為昆蟲個體或昆蟲種群；所述RT-PCR擴增的模板為昆蟲的cDNA；

所述昆蟲具體為蠋蝽。