[發明專利]純白色真姬菇Finc-W-247的分子標記及其獲得方法與應用

有效

• 申請號: 201310030553.7
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103289998A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 劉玉
• 申請（專利權）人: 上海豐科生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種純白色真姬菇Finc-W-247的分子標記，其特征在于：特異性PCR擴增引物對序列為5’-GACGACGTTTGTGGGGTGA-3'和5'-AGGGAGATCGACGTCCATATTG-3'，DNA片段大小為975bp。

2.一種純白色真姬菇Finc-W-247的分子標記的獲得方法，其特征在于包括如下步驟：

1）獲得菌絲或者子實體；

2）基因組DNA提??；

3）RAPD法分析并獲得特異DNA片段：采用RAPD法分析，獲得純白色真姬菇Finc-W-247的特異DNA片段，獲得該片段對應的隨機引物序列為：GTCCCGACGA；

4）特異引物設計：以上述獲得的特異DNA片段序列為基礎，設計特異PCR擴增引物，引物對序列是5'-GACGACGTTTGTGGGGTGA-3'和5'-AGGGAGATCGACGTCCATATTG-3'；

5）SCAR分子標記的PCR擴增：用特異PCR擴增引物對純白色真姬菇Finc-W-247的基因組進行SCAR-PCR擴增，得到975bp的特異分子標記。

6）電泳檢測。

3.根據權利要求2所述的一種純白色真姬菇Finc-W-247的分子標記的獲得方法，其特征在于：所述步驟3）RAPD法的PCR擴增反應體系為：總體積25μL：基因組模板20-30ng/μL1.0μL，隨機引物0.5pmol/μL1.0μL，10mM?dNTP?mix0.5μL，10×Taq緩沖液2.5μL，25mM?MgCl₂2.0μL，Taq酶5U/μL0.25μL，加水至25μL；PCR反應條件：預變性95℃3min；94℃45s，36℃60s，72℃2min，35個循環；72℃延伸10min；純白色真姬菇Finc-W-247菌株或其子實體特異DNA片段大小為989bp。

4.根據權利要求2或3所述的一種純白色真姬菇Finc-W-247的分子標記的獲得方法，其特征在于：所述步驟5）中SCAR分子標記的PCR擴增，其體系為：總體積25μL，模板20～30ng/μL1μL，Finc-W-247特異引物對0.5pmol/μL各0.5μL，10mM?dNTP?mix0.5μL，10×Taq?Buffer2.5μL，25mM?MgCl₂2.0μL，Taq酶5U/μL0.25μL，加水至25μL；PCR反應條件：預變性95℃3min；94℃30s，62℃30s，72℃1min，35個循環；72℃延伸5min。

5.根據權利要求1所述的一種純白色真姬菇Finc-W-247菌株的分子標記應用于純白色真姬菇Finc-W-247菌株的快速鑒定和檢測。