[發明專利]一種家蠶濃核病毒LAMP可視化快速檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201310026869.9
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103131796A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 劉吉平;楊吉龍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明屬于分子診斷和鑒定技術領域，具體地，涉及一種家蠶濃核病毒LAMP可視化快速檢測試劑盒及其檢測方法。?

背景技術

家蠶是鱗翅目模式昆蟲，具有重要的經濟價值，蠶絲及其織物是我國傳統的出口創匯物質。家蠶濃核病毒（Bombyx?mori?densovirus，BmDNV）是我國蠶繭生產中普遍發生的病毒病的病原，嚴重威脅著蠶絲業的持續穩定生產。?

家蠶病毒病除血液型膿病發病較快外，均屬慢性傳染病。蠶在感病初期外觀無任何癥狀，一般要在感病后4～5天才出現癥狀，但此時已接近晚期。病蠶是通過帶病毒的蠶糞傳染的，因此及早進行預知檢測和診斷，并采取一定的防控措施，可防止病毒病的擴散與蔓延。?

目前家蠶濃核病毒的主要檢測方法有特異病癥觀察法、免疫血清學方法、PCR方法等，其中免疫血清學采用雙向免疫擴散法（DID）、對流免疫電泳法（CIEP）、酶聯對流免疫電泳法（ELCIEP）、酶標組化法（IEHC）、可溶性酶-抗酶法（PAP）、斑點免疫結合測定法（DIBA）、生物素-親和素系統檢測法（ABS）以及膠乳凝集試驗法（LTA）等方法進行檢測，但這些方法存在病毒分離繁瑣、代價高、靈敏性地、特異性差、確診緩慢等因素，在生產檢測診斷應用中存在一定的局限性。盡管PCR方法應用于濃核病毒的檢測，在檢測靈敏度上有一定的改進，但由于需要精密的儀器和設備配套使用，仍然無法滿足蠶業生產和現場檢測的需要（王裕興，曹詒孫，錢元駿等.?酶對流免疫電泳對家蠶濃核病的早期診斷技術.?蠶業科學，1983，9(2):97-102）；錢元駿，胡雪芳，王紅林.?家蠶病毒病血清診斷實用化研究.?蠶業科學，1984，10(3):155-157；Kageyasu?S,?Hayakawa?T,?Isawa?H?et?al．Detection?of?the?Silkworm-pathogenic?virus?genomes?by?PCR．Journal?of?Sericultural?Science?of?Japan，1997，66(6):477-483；韓序，姚勤，高路等，家蠶濃核病毒（中國鎮江株）在不同感受性宿主體內的復制.?生物工程學報，2007，23(1):145-151；付艷紅，唐順明，覃光星等.家蠶濃核病毒中國（鎮江）株基因組的克隆及重組質粒轉染家蠶對濃核病毒的拯救.?蠶業科學，2008，34(3):453-458；余蔚，姚勤，郭忠建等.?家蠶濃核病毒中國株非結構蛋白1(NS1)的表達.?微生物學報，2008，48(2):191-196）。?

環介導核酸等溫擴增法（Loop-mediated?isothermal?amplification，LAMP）是日本學者Notomi等（2000）發明的一種新型體外等溫擴增特異核酸判斷的技術（Notomi?T,?Okayama?H,?Masubuchi?H?et?al..?2000.?Loop-mediated?isothermal?amplification?of?DNA.?Nucleic?Acids?Research,?28(12):?e63）。隨著LAMP技術的發展，該技術已成功應用于人類和動植物病毒、細菌以及寄生蟲等引起的疾病診斷和快速檢測（楊麗，何曉青，韋玉梅等.?環介導等溫擴增技術(LAMP)檢測人星狀病毒方法的建立及其在再生水檢測中的應用.生態毒理學報,2011,6(6):600-606；Diaeldin?A.?Salih?&?Awadia?M.?Ali?&?Zhijie?Liu?et?al.Development?of?a?loop-mediated?isothermal?amplification?method?for?detection?of?Theileria?lestoquardi.?Parasitol?Res.2012，（110）:533-538）。?

????LAMP法具有特異性強，敏感性高，操作簡便，快速、高效等優點，通過肉眼觀察產物顏色變化即可判斷結果，從而簡化了檢測過程，不需要特殊儀器，檢測時間也大大縮短，適宜于現場快速檢測和診斷。目前尚未見應用LAMP法檢測家蠶濃核病毒BmDNV的相關技術報道。?

發明內容

本發明的目的是克服現有家蠶濃核病毒BmDNV檢測技術的不足，提供一種家蠶濃核病毒LAMP可視化快速檢測試劑盒。?

????本發明的另一個目的是提供一種家蠶濃核病毒LAMP可視化快速檢測試劑盒的檢測方法。?

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：?