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[發明專利]一種家蠶濃核病毒LAMP可視化快速檢測試劑盒及其檢測方法無效

專利信息
申請號: 201310026869.9 申請日: 2013-01-24
公開(公告)號: CN103131796A 公開(公告)日: 2013-06-05
發明(設計)人: 劉吉平;楊吉龍 申請(專利權)人: 華南農業大學
主分類號: C12Q1/70 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 代理人: 任重
地址: 510642 廣*** 國省代碼: 廣東;44
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 家蠶 病毒 lamp 可視化 快速 檢測 試劑盒 及其 方法
【權利要求書】:

1.一種家蠶濃核病毒LAMP可視化快速檢測試劑盒,其特征在于,包括一對內側引物DFI1/?DBI1和一對外側引物DF1/?DB1,引物序列如SEQ?ID?NO:1~4所示。

2.根據權利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包含基因組DNA抽提緩沖液、LAMP反應液、陽性對照品、陰性對照品顯色液;

所述LAMP反應液除含有權利要求1所述引物還含有2×LAMP反應緩沖液、Bst?DNA?聚合酶、密封液和無菌水。

3.根據權利要求2所述試劑盒,其特征在于,所述2×LAMP反應緩沖液含有20?mM?Tris-HCl,pH8.8;10?mM?KCl;2?mM?MgSO4;20?mM(NH42SO4;0.1%?Triton?X-100;2.8?mM?dNTPs;1M甜菜堿;25mM?MgCl2

4.根據權利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述DNA抽提緩沖液含有10?mM?Tris-Cl,pH8.?0;0.?1?M?EDTA,pH?8.?0;0.?5%?SDS(十二烷基硫酸鈉)。

5.根據權利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述陽性對照品為BmDNV模板DNA或含BmDNV靶基因DNA片段的質粒、陰性對照品為正常家蠶組織模板DNA。

6.根據權利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述顯色液為SYBR?Green?I?、EvaGreen或鈣黃綠素。

7.根據權利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述試劑盒的反應體系為:

2×LAMP反應緩沖液????????????????????12.5μL;

DFI1/?DBI1(40pmol/μL)???????????????1μL;

DF1/?DB1(5?pmol/μL)???????????????????0.5μL;

Bst?DNA?聚合酶(8U/μL)??????????????1μL;

模板DNA??????????????????????????????2μL;

無菌水?????????????????????????????????8.0μL。

8.根據權利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述試劑盒的LAMP反應條件為60~65℃恒溫反應20~90?min;然后?80~100℃,1~10?min滅活。

9.根據權利要求2所述試劑盒,其特征在于,所述密封液為甘油。

10.一種用權利要求1至9任一項所述試劑盒檢測家蠶濃核病毒的方法,其特征在于,包括如下步驟:

S1.提取待測樣品DNA;

S2.在反應管中配置反應體系;

S3.向反應體系中加入密封液,在反應管蓋內側加入顯色液;

S4.反應:將反應管60~65℃恒溫放置20~90?min;然后?80~100℃,放置1~10?min滅活;

S5.結果判讀:將顯色液與反應產物混合;觀察顏色變化,反應產物顏色變為綠色,說明待測樣品含有家蠶濃核病毒;反應產物變為橙色,則不含有家蠶濃核病毒。

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