[發明專利]一種花藥快速誘導胚性愈傷組織再生植株的方法

無效

• 申請號: 201310026841.5
• 申請日: 2013-01-08
• 公開（公告）號: CN103444523A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 趙鳳霞;高相彬;王正平;李海峰;宋學立
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院煙草研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種葡萄花藥快速誘導胚性愈傷組織再生植株的方法，其特征在于：利用釀酒葡萄雷司令花藥為材料，進行花藥誘導胚性愈傷組織、愈傷組織分化培養、分化苗生根培養、煉苗移栽等步驟完成葡萄植株再生。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法按照以下步驟進行：

(1)花藥采集和消毒處理：葡萄盛花前12-14天，即花粉四分體到單核期，在天氣晴朗的上午摘取花藥飽滿的花蕾，4℃黑暗保存3天，然后對花蕾進行表面消毒。

(2)花藥愈傷組織培育：從消過毒的花蕾中取出花藥在無菌條件下接種到愈傷組織誘導培養基中。所述愈傷組織誘導培養基配方為：MS大量元素、MS微量元素、MS鐵鹽、0.5mg?L^-1鹽酸硫胺素、0.2mgL^-1鹽酸吡哆醇、0.2mg?L^-1煙酸、150mg?L^-1肌醇、2.0mg?L^-1P-CPA，0.20mg?L^-1TDZ，5mg?L^-1AgNO₃，10mgL^-1慶大霉素，100mg?L^-1半胱氨酸，50mg?L^-1水解酪蛋白、3％葡萄糖和0.28％脫乙酰吉蘭糖膠，pH?6.2。

(3)愈傷組織分化培養：將胚性愈傷組織接種到組織分化培養基上進行分化誘導。所述組織分化培養基配方為：MS大量元素、MS微量、MS鐵鹽、0.5mgL^-1鹽酸硫胺素、0.2mgL^-1鹽酸吡哆醇、0.5mgL^-1煙酸、150mg?L^-1肌醇、1.0mg?L^-1P-CPA，0.20mg?L^-1TDZ，0.5mg?L^-1NOA，0.01mg?L^-1GA₃、50mg?L^-1水解酪蛋白、2.0mg?L^-1甘氨酸、10g?L^-1椰乳、5％蔗糖和0.28％脫乙酰吉蘭糖膠，pH?6.2。培養條件為溫度25℃，濕度70％，光照1000-1500lux，光照時間12小時/天。

(4)分化苗生根培養：將分化苗轉入生根培養基誘導生根，所述生根培養基成分為1/2MS大量元素、MS微量元素、MS鐵鹽、0.1mg?L^-1鹽酸硫胺素、0.8mg?L^-1鹽酸吡哆醇、0.5mg?L^-1煙酸、100mg?L^-1肌醇、0.5mg?L^-1α-萘乙酸鈉、0.5mg?L^-1NOA、50mg?L^-1水解酪蛋白、2.0mg?L^-1甘氨酸、3％葡萄糖和0.28％脫乙酰吉蘭糖膠，pH?6.2。培養條件為先在光下培養一周，再暗培養一周，再在光下培養至正常生根，溫度25℃，濕度70％，光照1500-2000lux，光照時間12小時/天。

(5)煉苗、假植、移栽：當苗基部長出3-4條根，根長3cm時打開瓶蓋，環境溫度25℃，濕度85％，光照強度2000lux，煉苗5天；然后取出組培苗，自來水洗凈根部培養基，移栽到滅過菌的珍珠巖基質中，1/8MS營養液澆透后，每周澆灌一次培養液，加蓋與營養缽相同大小的上端剪口的塑料袋保持適度，25℃室內培養1個月，后移栽到大田。