[發明專利]一種從鐵皮石斛中提取多種活性成分的方法

有效

• 申請號: 201310026291.7
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103113483A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 榮龍;李嬌;原琳;榮永海
• 申請（專利權）人: 北京航空航天大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K36/8984;A61P35/00;A61P29/00;A61P1/00;A61P9/00;A61P37/04
• 代理公司: 北京永創新實專利事務所 11121
• 代理人: 姜榮麗

技術領域

本發明屬于中草藥活性成分的提取分離技術領域，具體涉及一種從鐵皮石斛中提取活性成分的方法。

背景技術

鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生附生草本植物的全草，是一種名貴的中草藥，具有增強機體免疫力、抗腫瘤、促進消化液分泌、抑制血小板凝集、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老和退熱止痛等藥理作用，其化學成分多樣，主要有生物堿、多糖、氨基酸、菲類化合物等。

多糖是鐵皮石斛中一類生物活性成分，在對鐵皮石斛化學成分的藥理篩選中，發現其主要藥效成分為多糖，且含量較高，具有較強的抗腫瘤和增強免疫功能活性，鐵皮石斛的生理活性強弱與多糖含量有關，因此鐵皮石斛多糖提取技術的開發和改進具有巨大醫用價值和廣闊的市場前景。目前，鐵皮石斛多糖的提取技術主要有傳統的熱水浸提，超聲輔助提取和微波輔助提取，傳統的提取方法存在提取時間長，提取效率低等缺點，不利于原材料的有效利用。

生物堿是存在于自然界中的一類含氮的堿性有機化合物。鐵皮石斛總生物堿的含量較其他品種金釵石斛及銅皮石斛、霍山石斛等低,說明生物堿非鐵皮石斛主要成分，但是生物堿具有抗腫瘤、抑制心血管、胃腸道疾病及止痛退熱等重要作用，在提取多糖的同時聯合提取生物堿，可以提高原材料的利用率，對于鐵皮石斛這一珍貴的中藥來說意義重大。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明提出一種從鐵皮石斛中聯合提取多種活性成分的方法，該方法以鐵皮石斛為原料，對其進行綜合利用，從中提取出主要活性成分即多糖，同時還可以獲得生物堿，該方法實現了鐵皮石斛原材料的綜合利用，具有提取時間短、提取率高、適用于工業化生產的特點。采用閃式提取技術（簡稱閃提）能夠在室溫及溶劑存在下數秒鐘內把植物的根、莖、葉、花、果實等物料破碎至細微顆粒，使組織內的有效成分迅速溶出，極大地提高了提取效率。

本發明提出的一種從鐵皮石斛中聯合提取多種活性成分的方法，具體包括以下步驟：

第一步：材料預處理：

稱量鐵皮石斛，粉碎，按照固液比為1:10~1:20g/ml加入超純水；

第二步：破碎后的鐵皮石斛進行閃提，得到鐵皮石斛粗提液；

第三步：將粗提液離心：

將閃提后的粗提液進行離心，多糖存在于離心后的上清液A中，生物堿存在于離心后的沉淀A中；

第四步：上清液Ａ中提取游離多糖；具體包括如下步驟：

步驟4.1：上清液A濃縮，得到濃縮液；

步驟4.2：醇沉得到多糖粗提物；

步驟4.3：多糖三脫水，得到游離多糖。

第五步，沉淀Ａ中提取結合多糖和生物堿。具體包括如下步驟：

將第三步中對粗提液離心得到的沉淀A中加入純水，按照沉淀質量0.6%加入纖維素酶，按照沉淀質量1.5%加入木瓜蛋白酶，然后調節至PH=5，置于水浴鍋中，溫度為50℃，攪拌器攪拌，反應1.5h；完成后，將反應后的溶液加熱至沸騰，并且保持沸騰狀態3min；然后離心，轉速5000rpm，時間15min，結合多糖存在于離心后的上清液B中，保存離心后的沉淀B；取上清液B中提取結合多糖，轉步驟5.1；在沉淀B中提取生物堿，轉步驟5.2；

步驟5.1，提取結合多糖：

取上清液B加入乙醇，直至最終溶液中的乙醇體積濃度達到80%，放置1.5h，離心，分離出的沉淀C即為結合多糖，最后進行三脫水，得到結合多糖；

步驟5.2，提取生物堿：

取沉淀B，加入純度為90%的乙醇，離心取上清液C；將上清液C加入三氯甲烷，三氯甲烷揮發后得到凝固狀的生物堿。

本發明具有的優點在于：

1、本發明提出的一種從鐵皮石斛中提取活性成分的方法，通過閃式提取器提取鐵皮石斛有效成分，與傳統的方法相比，該方法提取條件溫和，提取時間短，僅1～3分鐘，溶劑用量少，提取效率高。

2、本發明提出的一種從鐵皮石斛中提取活性成分的方法，在閃式提取條件的優化中，采用了正交試驗設計的方法，優化了實驗條件，在此條件下多糖的提取率與傳統的方法相比有了很大幅度的提高。

3、本發明提出的一種從鐵皮石斛中提取活性成分的方法，實現了結合多糖和游離多糖的分離提取，從初次離心后的沉淀中提取出結合多糖，提高了鐵皮石斛多糖的有效提取效率和綜合利用率，避免了資源的浪費。

4、本發明提出的一種從鐵皮石斛中提取活性成分的方法，開發了一種多糖和生物堿的聯合提取工藝，從初次離心后的沉淀中提取生物堿，實現了鐵皮石斛的綜合利用，對于這種珍貴的中藥材來說是極其重要的。

附圖說明