[發(fā)明專利]與大口黑鱸孵化率相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310026074.8
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103103183A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李勝杰;白俊杰;韓林強;馬冬梅;葉星;樊佳佳;姜鵬;全迎春;于凌云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 張海文

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物基因工程技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種與大口黑鱸孵化率相關(guān)的分子標(biāo)記及其在輔助篩選高孵化率大口黑鱸親本上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

大口黑鱸（Micropterus?salmoides），俗名加州鱸，原產(chǎn)于美國密西西比河流域，屬廣溫性魚類，具有生長快、病害少、耐低溫、肉質(zhì)鮮美和容易起捕等特點，是我國重要的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟品種之一。目前我國養(yǎng)殖的大口黑鱸是由野生引進種家養(yǎng)馴化而成的，且養(yǎng)殖20多年來，由于不注重親本留種需遵守的操作規(guī)程，缺乏定向人工選育，致使大口黑鱸種質(zhì)的質(zhì)量急劇下降，主要表現(xiàn)在餌料轉(zhuǎn)化率低、個體生長緩慢、苗種孵化率低等，大口黑鱸苗種的質(zhì)量直接關(guān)系到大口黑鱸養(yǎng)殖經(jīng)濟效益，在一定程度上影響大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的健康穩(wěn)定發(fā)展。

魚苗孵化率高低是直接影響育苗場魚苗產(chǎn)量的一個重要因素。提高魚苗的孵化率在一定程度上降低孵化生產(chǎn)成本，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。大口黑鱸魚卵的孵化率受繁殖親魚質(zhì)量及外部環(huán)境條件等多種因素影響，其中提高大口黑鱸繁殖親本的質(zhì)量來提高大口黑鱸魚苗孵化率是可控的重要方法之一。普通生產(chǎn)上提高魚苗孵化率往往是通過挑選個體大、身體健壯的成魚作為繁殖用親本，在專池中進行強化培育，采用投喂優(yōu)質(zhì)飼料，適時換水等手段促進親魚成熟，這種傳統(tǒng)方法僅從表型上去判斷親本的質(zhì)量往往達不到理想的結(jié)果，無法從分子水平上剔除具有基因缺陷的親本，從根本上來保障親本的質(zhì)量。

隨著分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的發(fā)展，DNA分子標(biāo)記因其具有多態(tài)性高、遺傳穩(wěn)定、檢測方便等優(yōu)點日益成為遺傳育種研究中首選的遺傳標(biāo)記。若將這些遺傳標(biāo)記與生產(chǎn)性狀相關(guān)聯(lián)在一起，即可實現(xiàn)從DNA?水平上進行選擇育種，克服了傳統(tǒng)方法受人為因素影響大的不足，提高了選擇的準(zhǔn)確性。但是，現(xiàn)在仍未發(fā)現(xiàn)與大口黑鱸孵化相關(guān)的分子標(biāo)記，影響了大口黑鱸高孵化率親本的篩選效果。

促生長激素釋放激素（growth?hormone?releasing?hormone，GHRH）是由下丘腦分泌的一種胰高血糖素超家族多肽激素，其主要生物學(xué)功能是刺激垂體細胞合成、分泌生長激素。此外，其在胚胎期對細胞增殖分化，腦垂體形成等也有重要作用（Mayo?et?al.，1985；Mayo?et?al.，2000；Billestrup?et?al.，1986）。研究表明，GHRH及其受體的自然缺失或異常會導(dǎo)致諸如侏儒癥，巨人癥之類的現(xiàn)象（Desai?et?al.，2005；Sanno?et?al.，1997）；通過外源適度增加GHRH的含量能夠促進動物的生長（Zhang?et?al.，2008）。由于GHRH與動物的生長性狀具有緊密的聯(lián)系，使之成為理想的分子標(biāo)記育種候選基因。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種與大口黑鱸孵化率相關(guān)的分子標(biāo)記及其在輔助篩選高孵化率大口黑鱸親本上的應(yīng)用。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

大口黑鱸隱性缺失致死基因片段A，其位于大口黑鱸GHRH基因啟動子序列上的第97～162bp。

所述大口黑鱸GHRH基因啟動子序列如SEQ?ID?NO:1所示，其第97～162bp上的大口黑鱸隱性缺失致死基因片段A的序列如SEQ?ID?NO:2所示。

大口黑鱸隱性缺失致死基因片段A作為分子標(biāo)記在輔助篩選高孵化率大口黑鱸親本上的應(yīng)用。

一種輔助篩選高孵化率大口黑鱸親本的方法，包括檢測大口黑鱸樣品的基因組DNA，篩選含有隱性缺失致死基因片段A的純合體即可。

具體包括如下步驟：

1）根據(jù)權(quán)利要求1所述基因片段A的5’和3’側(cè)翼序列，設(shè)計并合成引物；

2）利用步驟1）的引物對大口黑鱸樣品的基因組DNA進行擴增；

3）根據(jù)擴增結(jié)果篩選親本：基因組DNA中含有基因片段A的純合體即為高孵化率大口黑鱸親本。

作為其中一個優(yōu)選方案，上述方法所用引物的序列如下所示：

P1：GGCCCGGGCTGGTCTGTTAAATACA（SEQ?ID?NO:3）

P2：GCGCAACACAAGAGCACATTGCTT（SEQ?ID?NO:4）

當(dāng)PCR產(chǎn)物為316bp的單一條帶時，該樣品為含有基因片段A的純合體，當(dāng)PCR產(chǎn)物出現(xiàn)316bp和250bp兩種DNA條帶時，該樣品為含有基因片段A的雜合體。