[發明專利]一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法

在審

• 申請號: 201310025755.2
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103014121A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 黃和;韓毓旺;盧圣國;朱玲燕;徐晴
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;G01N21/33
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

1.一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，在菌株篩選顯色反應中，加入聚聯乙炔囊泡，作為顯色反應載體。

2.根據權利要求1所述的一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，所述菌株篩選顯色反應采用滴定顯色法、固體雙層平板法、固體單層平板法。

3.根據權利要求2所述的一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，所述滴定顯色法采用以下步驟：

（1）挑取單菌落菌株，于液體LB培養基中在25至30℃培養20至48h，得到待測菌株培養液；

（2）取發酵培養液體積份數1至3份，取物質的量為0.1至0.8mmol/l的聚聯乙炔溶液體積份數3至5份，室溫下滴定靜置反應20min；

（3）用紫外分光光度計測定其在660nm和540nm的吸光值。

4.根據權利要求2所述的一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，所述固體雙層平板法采用以下步驟：

（1）配制低熔點LB固體培養基，在60℃下攪拌至均勻，得到培養基a；

（2）在70-90℃，于低熔點LB固體培養基a中加入聚聯乙炔囊泡溶液，控制聚聯乙炔的物質的量為0.1至0.8mmol/l,得帶培養基b；

（3）配制LB固體培養基，于70℃下攪拌均勻，得到培養基c；

（4）將培養基c注入平板，冷卻至室溫凝固；

（5）將培養基b倒在凝固的培養基上，冷卻至室溫；

（6）將冷卻后的雙層平板于254nm的紫外光照射15至20min；

（7）將待篩選菌種均勻涂抹于平板上，于25至35℃恒溫培養箱中培養20-48小時；

（8）用紫外分光光度計測定其在660nm和540nm的吸光值。

5.根據權利要求2所述的一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，所述固體單層平板法采用以下步驟：

（1）在70-90℃，于LB固體培養基中加入聚聯乙炔囊泡溶液，控制聚聯乙炔的物質的量為0.1至0.8mmol/l；

（2）倒平板并冷卻至室溫，得到固體單層平板；

（3）將冷卻后的雙層平板于254nm的紫外光照射15至20min；

（4）將待篩選菌種均勻涂抹于平板上，于25至35℃恒溫培養箱中培養20-48小時；

（5）用紫外分光光度計測定其在660nm和540nm的吸光值。

6.根據權利要求1所述的一種篩選產生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，聚聯乙炔囊泡溶液采用以下步驟合成：

（1）取聯乙炔單體溶于氯仿中，過0.45μm濾膜，旋轉蒸發去除氯仿，加蒸餾水，配制聯乙炔單體摩爾含量為0.5至2mmol/l的溶液；

（2）將聯乙炔單體溶液于60至90℃下超聲水合5至30min，得到非聚合的囊泡溶液；

（3）非聚合的囊泡溶液于254nm的紫外光下照射5至30min。