[發(fā)明專利]一種篩選產(chǎn)生物表面活性劑菌株的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310025755.2
• 申請(qǐng)日: 2013-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103014121A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃和;韓毓旺;盧圣國(guó);朱玲燕;徐晴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;G01N21/33
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務(wù)所 32230
• 代理人: 徐蓓

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種快速篩選產(chǎn)生物表面活性劑菌株的方法，屬于微生物菌株篩選技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

生物表面活性劑（biosurfactants）是一種由微生物合成、結(jié)構(gòu)多樣的表面活性物質(zhì)，包括糖脂、脂肽、脂蛋白、磷脂以及中性類脂衍生物等。與化學(xué)合成表面活性劑相比，生物表面活性劑具有結(jié)構(gòu)多樣、無(wú)毒或低毒及生物可降解性，可引入化學(xué)方法難以合成的新化學(xué)基團(tuán)等優(yōu)點(diǎn)，且在極端pH、高溫、高鹽條件下穩(wěn)定。

現(xiàn)有技術(shù)主要包括以下幾類篩選方法：1)血平板篩選法和原油平板篩選法，2)液滴分散法和液滴軸線對(duì)稱分析法，3)傅立葉變換紅外光譜篩選法。前兩類篩選方法是以檢測(cè)體系的表觀性質(zhì)—表面張力或乳化性能為出發(fā)點(diǎn)，不能識(shí)別代謝物質(zhì)的分子信息，選擇性不強(qiáng)，而且易受到體系中其他物質(zhì)的干擾。光譜法雖然能給出一定的分子信息，但是所需設(shè)備復(fù)雜昂貴，數(shù)據(jù)分析繁瑣，可靠性較低，不能實(shí)現(xiàn)快速高通量篩選。

因此，開(kāi)發(fā)出一種快速高效、方便實(shí)用的工業(yè)生物表面活性劑的分析檢測(cè)新方法對(duì)生物表面活性劑產(chǎn)業(yè)具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明以聚聯(lián)乙炔囊泡為載體，將聚聯(lián)乙炔囊泡加入傳統(tǒng)的篩選培養(yǎng)基中，通過(guò)測(cè)定變色囊泡與發(fā)酵液分子作用后的變色響應(yīng)程度判斷菌株產(chǎn)量，或者通過(guò)滴定顯色的方法來(lái)判斷表面活性劑菌株的存在與否。

本發(fā)明的技術(shù)目的是提供一種篩選產(chǎn)生物表面活性劑菌株的方法，為了實(shí)現(xiàn)發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：

一種篩選產(chǎn)生物表面活性劑菌株的方法，其特征在于，在菌株篩選顯色反應(yīng)中，加入聚聯(lián)乙炔囊泡，作為顯色反應(yīng)載體。

本發(fā)明所述的菌株篩選顯色反應(yīng)采用滴定顯色法、固體雙層平板法、固體單層平板法。

本發(fā)明所述的聚聯(lián)乙炔囊泡溶液采用以下步驟合成：

（1）取聯(lián)乙炔單體溶于氯仿中，過(guò)0.45μm濾膜，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除氯仿，加蒸餾水，配制聯(lián)乙炔單體摩爾含量為0.5至2mmol/L的溶液；

（2）將聯(lián)乙炔單體溶液于60至90℃下超聲水合5至30min，得到非聚合的囊泡溶液；

（3）非聚合的囊泡溶液于254nm的紫外光下照射5至30min。

本發(fā)明所述的顯色反應(yīng)中菌體的濃度為20至1000個(gè)/mL。

本發(fā)明所述的滴定顯色法采用以下步驟：

（1）挑取單菌落菌株，于液體LB培養(yǎng)基中在25至30℃培養(yǎng)20至48h，得到待測(cè)菌株培養(yǎng)液；

（2）取發(fā)酵培養(yǎng)液體積份數(shù)1至3份，取物質(zhì)的量為0.1至0.8mmol/L的聚聯(lián)乙炔溶液體積份數(shù)3至5份，室溫下滴定靜置反應(yīng)20min；

（3）用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其在660nm和540nm的吸光值。

本發(fā)明所述的固體雙層平板法采用以下步驟：

（1）配制低熔點(diǎn)LB固體培養(yǎng)基，在60℃下攪拌至均勻，得到培養(yǎng)基a；

（2）在70-90℃，于低熔點(diǎn)LB固體培養(yǎng)基a中加入聚聯(lián)乙炔囊泡溶液，控制聚聯(lián)乙炔的物質(zhì)的量為0.1至0.8mmol/L,得帶培養(yǎng)基b；

（3）配制LB固體培養(yǎng)基，于70℃下攪拌均勻，得到培養(yǎng)基c；

（4）將培養(yǎng)基c按體積份數(shù)計(jì)3至5份注入平板，冷卻至室溫凝固；

（5）將培養(yǎng)基b按體積分?jǐn)?shù)計(jì)2至5份倒在凝固的培養(yǎng)基上，冷卻至室溫；

（6）將冷卻后的雙層平板于254nm的紫外光照射15至20min；

（7）將待篩選菌種均勻涂抹于平板上，于25至35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20-48小時(shí)；

（8）用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其在660nm和540nm的吸光值。

本發(fā)明所述的固體單層平板法采用以下步驟：

（1）在70-90℃，于LB固體培養(yǎng)基中加入聚聯(lián)乙炔囊泡溶液，控制聚聯(lián)乙炔的物質(zhì)的量為0.1至0.8mmol/L；

（2）倒平板并冷卻至室溫，得到固體單層平板；

（3）將冷卻后的雙層平板于254nm的紫外光照射15至20min；

（4）將待篩選菌種均勻涂抹于平板上，于25至35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20-48小時(shí)；

（5）用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其在660nm和540nm的吸光值。

本發(fā)明中所列舉的顯色反應(yīng)過(guò)程并不是窮盡列舉。

本發(fā)明的有益效果在于：

（1）本發(fā)明提供的快速篩選產(chǎn)表面活性劑菌株的方法，通過(guò)改變培養(yǎng)基的配方，有效降低了產(chǎn)表面活性劑生產(chǎn)菌株篩選的成本。