[發(fā)明專利]應用近紅外光譜分析技術(shù)制備銀杏葉提取物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310025331.6
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103115892A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設計）人: 王如偉;葉劍鋒;姚德中;姚建標;蘇一多;錢笑芳
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江康恩貝制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N21/35
• 分類號: G01N21/35
• 代理公司: 杭州之江專利事務所(普通合伙) 33216
• 代理人: 朱楓

1.一種應用近紅外光譜分析技術(shù)制備銀杏葉提取物的方法依次包括以下步驟：銀杏葉粉碎、提取、?濃縮、大孔樹脂柱分離純化、收集洗脫液、濃縮、干燥；（解析溶劑使用乙醇）；其特征在于，通過在對大孔樹脂分離純化過程中進行取樣時，用近紅外光譜建立模型，控制乙醇解析過程中有效成分收集的起點與終點,具體包括下述步驟：

a.樣品的準備

正常生產(chǎn)時，在大孔樹脂柱層析工序中采集樣品，樣品采集多個，每兩個采集時間間隔固定；

b.銀杏葉黃酮含量的檢測

對步驟a所采集樣品中的銀杏黃酮和內(nèi)酯一一利用HPLC法進行準確的含量測定；

銀杏黃酮HPLC檢測的色譜條件：?色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：甲醇：0.4%磷酸（50：50）；流速：1.0ml/min；進樣量：10μL；檢測波長：360nm；

銀杏內(nèi)酯HPLC檢測的色譜條件：?色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：正丙醇：四氫呋喃：水（1：15：84）；流速：1.0ml/min；進樣量：10μL；檢測波長：360nm；

c..建立模型

c1.光譜預處理

在穩(wěn)定的實驗條件下進行光譜掃描，掃描模式設為“Ratio?mode”，每次掃描樣品的光譜的同時進行光譜背景的檢測，并自動進行光譜背景剔除；

c2.獲取近紅外光譜

使用近紅外光譜儀的掃描軟件對樣品進行光譜采集；操作時，將儀器的液體探頭插入燒杯中的溶液中，使液體完全覆蓋探頭的測樣口，采用透射的方式對樣品進行掃描；為保證采集光譜的代表性，每個批次的樣品采集光譜時，在試劑瓶中3個不同位各采集1張光譜；

采用透射的測樣方式，每一張光譜都是100次掃描的平均結(jié)果；波長范圍從1100?nm到2300?nm，波長增量為2.0?nm；光譜數(shù)據(jù)為比率模式下采集；

c3?模型的創(chuàng)建

將紅外光譜采集的數(shù)據(jù)導入定量分析軟件，利用HPLC法檢測得到的含量數(shù)據(jù)和光譜數(shù)據(jù)一一對應，創(chuàng)建模型；所有樣品都是在正常生產(chǎn)過程中在線取樣，銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯分別隨機挑選幾個樣品不參與建模，作為驗證集，其他的樣品建立數(shù)學模型；

將經(jīng)過預處理后的光譜數(shù)據(jù)與樣品含量數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法（PLS1），交叉－驗證法（cross-validation），用The?Unscrambler定量分析軟件建立模型；光譜和化學值異常值（outlier）分別采用光譜影響值Leverage和化學值誤差Residual這兩個統(tǒng)計量來檢驗剔除；經(jīng)過異常值的剔除進行逐步優(yōu)化，得到理想的校正模型；

d.模型驗證

利用建立好的樣品數(shù)學模型對預測樣品進行預測驗證，算出預測偏差；

e.結(jié)果分析

將銀杏黃酮含量突然升高的點判定為以銀杏黃酮作為參考參數(shù)時的收集起點，下降至平穩(wěn)水平的點判定為以銀杏黃酮作為參考參數(shù)時的收集終點；將銀杏內(nèi)酯含量突然升高的點判定為以銀杏內(nèi)酯作為參考參數(shù)時的收集起點，下降至平穩(wěn)水平的點判定為以銀杏內(nèi)酯作為參考參數(shù)時的收集終點，結(jié)合兩者的變化情況判斷銀杏提取物一乙醇洗脫過程中的收集起點和終點，主要以考慮銀杏黃酮的含量變化為主。