[發(fā)明專利]一種同時檢測動物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310024689.7
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103940918A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李冰;張繼瑜;周緒正;牛建榮;魏小娟;李金善;李劍勇;楊亞軍;劉希望;張杰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 馬正良

1.一種同時檢測動物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其步驟是：

a.?精密稱取青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品、二氫青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品，分別置于棕色容量瓶中，用色譜甲醇或乙腈配制得標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密稱取青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品，置于棕色容量瓶中，用色譜甲醇或乙腈配制得內(nèi)標(biāo)溶液；

b.?取動物空腹靜脈血漿，加入上述a得到的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合40-50s，得血漿樣品；動物給藥后取靜脈血漿，加入上述a得到的內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合40-50s，得供試樣品；

c.?將b步驟所得的血漿樣品和供試樣品分別加入2倍體積乙腈沉淀蛋白，渦旋震蕩30-40s，離心，取上清液；

d.?固相萃取小柱處理為取固相萃取小柱，加1ml甲醇和1ml?1M醋酸沖洗，再用1ml甲醇沖洗，備用；

e.?將c步驟得到的上清液分別上處理好的固相萃取小柱，用1M醋酸和20%甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷(V:V=2:3)洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈桑瑲堅眉状蓟蛞译嫒芙猓吹脴?biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液，備用；

f.?高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS/MS）測定供試品溶液，測定條件用碳十八烷基鍵合硅膠固定相色譜柱，流動相A:B=60:40（v:v），其中A:乙腈；B：純凈水（1mmol乙酸銨，0.1%甲酸，0.02%乙酸），流速0.4mL·?min^-1，電噴霧離子化（ESI）模式，正（+）離子多反應(yīng)監(jiān)測，毛細(xì)管出口端電壓：45v；碰撞能量：25v；deta?EMV+：200v；干燥氣體（N₂）流速10L·min^-1，噴霧器30psi，氣體溫度350℃，毛細(xì)管電壓?4000?V；

g.?將e得到的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液按f所述色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，得到總離子流圖和質(zhì)譜圖，測定峰面積，分別以青蒿琥酯和二氫青蒿素濃度（X）為橫坐標(biāo)，青蒿琥酯、二氫青蒿素分別與內(nèi)標(biāo)青蒿素的峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，計算待測物濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時檢測動物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱填料可為鍵合硅膠填料，或為聚合物吸附填料，或為石墨碳反相填料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時檢測動物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱為Waters?Oasis?HLB固相萃取小柱，填料為由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體聚合成的大孔共聚物填料。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時檢測動物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其特征在于，所述動物可為羊，牛。