[發(fā)明專利]一種血漿腎素活性的測定方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310024180.2
• 申請日: 2013-01-22
• 公開（公告）號: CN103116017A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寧光;劉聰;王衛(wèi)慶;蘇颋為;周薇薇;崔斌
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市內(nèi)分泌代謝病研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種血漿腎素活性的測定方法及其應(yīng)用，屬于生物測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，繼發(fā)性高血壓約占高血壓人群的10-20%，其中最常見的就是原發(fā)性醛固酮增多癥（簡稱原醛癥），該病是1955年由Conn首先發(fā)現(xiàn)并命名的一種腎上腺疾病，其致病機(jī)制主要是腎上腺皮質(zhì)腫瘤或增生的腎上腺分泌過量的醛固酮，從而導(dǎo)致水鈉潴留、血容量增加、腎素-血管緊張素系統(tǒng)活性受抑制。其臨床表現(xiàn)主要為高血壓、低血鉀、肌無力、多尿、堿血癥。在大多數(shù)教科書中，原醛癥在高血壓人群中占不到2%，但此項(xiàng)數(shù)據(jù)是基于小樣本量的高血壓調(diào)查，且其中的原醛癥患者皆表現(xiàn)為典型的臨床特點(diǎn)，包括低鉀血癥、腎素活性降低和醛固酮過量分泌。Conn曾斷言原醛癥患病率可能高達(dá)20%，因?yàn)閷Ω哐獕夯颊呤w解剖發(fā)現(xiàn)，許多患者腎上腺都有結(jié)節(jié)。而隨著ARR這一新的診斷指標(biāo)的應(yīng)用，在過去被認(rèn)為是低腎素性原發(fā)性高血壓的病例都?xì)w入原醛癥的范圍。越來越多證據(jù)表明，原醛癥患病率在高血壓人群中達(dá)到10%，這使得原醛癥比糖尿病和甲狀腺疾病更為常見，同時(shí)也必將影響對這些被當(dāng)做是原發(fā)性高血壓患者的治療。Nadar等報(bào)道了目前在世界范圍內(nèi)認(rèn)可的在未篩選的高血壓患者中原醛癥的患病率很低，大概在2%，甚至小于1%。而最近一些報(bào)道表明，高血壓患者中原醛癥患病率可達(dá)10-15%。但是，文獻(xiàn)對該患病率的報(bào)道多有不同。Gordon等報(bào)道高血壓人群中原醛的患病率是未知的，且隨著地域和種族而不同。最新的來自Mayo?Clinic的報(bào)道表明，大約20%的高血壓最終診斷為原醛癥。近年研究發(fā)現(xiàn)，醛固酮過多是導(dǎo)致心肌肥厚、心力衰竭和腎功能受損的重要危險(xiǎn)因素，與原發(fā)性高血壓患者相比，原發(fā)性醛固酮增多癥患者的心臟、腎臟等高血壓靶器官的損害更為嚴(yán)重，腦血管病的發(fā)生率也明顯增加。由于此類患者大部分可以通過手術(shù)或相應(yīng)藥物治療達(dá)到良好控制，所以早期診斷、早期治療就顯得至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了提供一種血漿腎素活性的測定方法及其應(yīng)用，通過這種測定方法，可以快速、準(zhǔn)確測定血清醛固酮的含量，為早期診斷高血壓患病情況提供依據(jù)。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種血漿腎素活性的測定方法，其步驟為：

1）準(zhǔn)備儲存液：

a、準(zhǔn)備酶促反應(yīng)抑制液：在小管內(nèi)加入標(biāo)注體積的去離子水，輕輕混勻，抑制液應(yīng)貯存在2-8℃。

b、貯備沖洗液：把小管內(nèi)液體倒入950ml去離子水中，混勻，貯存在2-8℃。

2）酶促反應(yīng)-血管緊張素I的生成：

a、在200ul樣品血清中加入200ul預(yù)冷的酶促反應(yīng)抑制液，輕輕混勻。

b、把每份混合液平均分成兩份200ul，分別轉(zhuǎn)移到兩個小管中。

c、把第一份小管液放入4℃水浴中（置于4℃冰箱中），振蕩孵育1小時(shí)，用來測定血管緊張素I的基礎(chǔ)濃度。

f、把第二份小管液放入37℃水浴中，振蕩孵育1小時(shí)，用來測定生成的血管緊張素I濃度。

g、孵育結(jié)束，把第二份小管液從37℃迅速降溫至4℃。

3）免疫測定：

在抗體包被管內(nèi)依次加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品或50ul經(jīng)37℃和4℃孵育的樣品（共三份）加入示蹤劑200ul，混勻。

18-25℃振蕩孵育2小時(shí)，振速大于280rpm。

除空白管外，終止孵育。用2ml沖洗液沖洗。終止兩次。測定活性（cpm）一分鐘。

a標(biāo)準(zhǔn)曲線：以B/T(%)或B/B₀(%)的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的血管緊張素I濃度為橫坐標(biāo)作圖。

樣品血清：對應(yīng)樣品37℃或4℃各自位于橫坐標(biāo)的B/T(%)或B/B₀(%)自然對數(shù)值，讀出縱坐標(biāo)相應(yīng)的血管緊張素I濃度。計(jì)算血漿腎素活性：血漿腎素活性是間接測定每小時(shí)體外生成血管緊張素I的量。由37℃生成的血管緊張素I濃度減去4℃的基礎(chǔ)濃度得到。

本發(fā)明血漿腎素活性采用采用放射免疫方法，試劑盒購自捷克Immunotech公司。

通過本發(fā)明提供的血漿腎素活性的測定方法，所得出的血漿腎素活性可以應(yīng)用于計(jì)算醛固酮/腎素比值（ARR），進(jìn)而可以早期診斷高血壓患病情況。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)：

現(xiàn)場收集的血液在兩小時(shí)內(nèi)分離、分裝，根據(jù)相應(yīng)的檢查要求，放入－80度冰箱保存，各臨床中心通過冷鏈快遞運(yùn)輸至上海市瑞金醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，集齊一定數(shù)量檢測。

1）準(zhǔn)備儲存液：