[發明專利]一種高產L-苯丙氨酸的重組谷氨酸棒桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201310023160.3
• 申請日: 2013-01-22
• 公開（公告）號: CN103074292A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 陳堅;張傳志;堵國成;康振
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/22;C12R1/15
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種高產L-苯丙氨酸的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于過量表達3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶基因，抗反饋抑制的分支酸變位酶/預苯酸脫水酶基因，轉酮醇酶基因及磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因。

2.權利要求1所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于所述3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶基因來源于谷氨酸棒桿菌（Corynebacterium?glutamicum）。

3.權利要求1所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于所述轉酮醇酶基因來源于谷氨酸棒桿菌。

4.權利要求1所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于所述磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因來源于谷氨酸棒桿菌。

5.權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于所述3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶基因、抗反饋抑制的分支酸變位酶/預苯酸脫水酶基因采用誘導表達載體pXMJ19進行表達。

6.權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于所述轉酮醇酶基因、磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因采用誘導表達載體pECXK99E進行表達。

7.應用權利要求1所述重組谷氨酸棒桿菌發酵生產L-苯丙氨酸的方法，其特征在于將所述重組谷氨酸棒桿菌活化后制備發酵種子，發酵種子以10%的接種量轉入發酵培養基，于30°C、200rpm條件下培養72h。

8.權利要求7所述的方法，其特征在于所述發酵培養基組成為（g/L）：葡萄糖130，硫酸銨25，玉米漿8，磷酸二氫鉀1，七水合硫酸鎂0.5，碳酸鈣20，pH6.8-7.0，裝液量20mL/250mL。