[發明專利]用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310021667.5
• 申請日: 2013-01-22
• 公開（公告）號: CN103083651A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 劉睿;吳皓;程建明;卞慧敏;王令充
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K47/48;A61K47/42;A61P17/00;C07K19/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 楊海軍

1.一種用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，所述穿膜肽通過與肉毒毒素組合的形式存在或者穿膜肽通過與肉毒毒素形成融合蛋白的形式存在。

2.根據權利要求1所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，?穿膜肽通過與肉毒毒素組合的形式存在時，所述的穿膜肽的氨基酸序列為精氨酸的直鏈聚合物R_n，其中n?=?3~16。

3.根據權利要求1所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，穿膜肽通過與肉毒毒素形成融合蛋白的形式存在時，所述的穿膜肽的序列為精氨酸的直鏈聚合物R_n，其中n?=?3~16。

4.根據權利要求1所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，穿膜肽通過與肉毒毒素形成融合蛋白的形式存在時，所述的穿膜肽的序列為具有HIV-1轉錄激活因子Tat蛋白轉導結構域Tat-PTD_49-57序列片段。

5.根據權利要求1所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，通過基因重組的方式獲得穿膜肽與肉毒毒素的融合蛋白，具體方法為：采用PCR方法擴增出穿膜肽與A型肉毒毒素的基因片段，采用overlap法連接后將擴增產物和大腸桿菌表達質粒pET-22b用限制性內切酶EcoR?I以及Xho?I雙酶切后連接，并轉化至大腸桿菌DH5α中，用氨芐青霉素篩選陽性克隆，抽提經測序鑒定正確的重組質粒，轉化至大腸桿菌BL21中，利用氨芐青霉素抗性篩選出構建成功的轉化子，在37℃經IPTG誘導4小時后，收獲融合蛋白并使用Ni親和層析柱進行分離純化，獲得穿膜肽與A型肉毒毒素的融合蛋白。

6.根據權利要求1至4任一項所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，所述的肉毒毒素未A、B、C、D、E、F或G型肉毒毒素。

7.根據權利要求1所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，將穿膜肽與肉毒毒素的組合物或者穿膜肽與肉毒毒素形成的融合蛋白采用天然或合成的磷脂包裹制備成脂質體。

8.根據權利要求1至4任一項所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，所述的外用制劑為溶液劑、軟膏劑、凝膠劑、乳劑、霜劑、氣霧劑或貼劑。

9.根據權利要求2所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物，其特征在于，穿膜肽與肉毒毒素形成的組合物，外用制劑中含有肉毒毒素5單位到3000單位，外用制劑中穿膜肽的重量百分含量為0.01%~40%。

10.權利要求1至4任一項所述的用于外用制劑的穿膜肽介導的肉毒毒素的組合物在制備治療眉間皺紋、鼻唇線、魚尾紋、嘴角紋或抬頭紋醫學或美容病癥中的應用。