[發明專利]抗重茬修復三七連作土壤生態菌劑的制備方法

無效

• 申請號: 201310020577.4
• 申請日: 2013-01-21
• 公開（公告）號: CN103045582A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 張清敏;唐景春;張彥峰;王發云;王麟猛;趙穎;張瑩捷
• 申請（專利權）人: 南開大學;文山市盛大中藥材專業合作社;昆明天泰昌生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C09K17/14;C12R1/125;C12R1/10;C12R1/12;C12R1/46;C12R1/74;C12R1/79;C12R1/465;C09K101/00
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1.抗重茬修復三七連作土壤生態菌劑的制備方法，包括發酵步驟，是將抗重茬病益生菌菌劑的生產菌種接種先分別培養，然后用以玉米粉-馬鈴薯-豆粕為主要成分的培養基中進行混合擴大發酵培養，其特征在于所述的發酵過程是在30℃、pH值為7.2-7.6的條件下進行的混合好氧發酵過程。生產菌種選用枯草芽孢桿菌CGMCC1.1630(Bacillus?subtilis)，地衣芽孢桿菌CGMCC1.518(Bacillus?licheniformis)，多粘芽孢桿菌CGMCC1.516(Paenibacillus?polymyxa)，糞鏈球菌CGMCC1.101(Streptococcus?feaculis)，熱帶假絲酵母CGMCC2.1773(Candida?tropicalis)，淡紫擬青霉CGMCC3.4034(Paecilomyces?lilacinus)，細黃鏈霉菌CGMCC4.399(Streptomyces?microflavus)等7株細菌-真菌；將發酵終產物吸附、固定化于用草炭在無氧或少氧、400℃下炭化的草炭生物炭上而制備成的固體粉末菌劑。?

2.根據權利要求1所述的預防三七重茬病益生菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述的二級、三級擴大培養的培養基以玉米粉-馬鈴薯-豆粕為主要成分的培養基。培養基組成：玉米粉30g，去皮馬鈴薯20g，豆粕2g，蔗糖2g，硝酸鉀1.0g，磷酸氫二鉀0.5g，硫酸鎂0.5g，氯化鈉0.5g，硫酸亞鐵0.001g，蒸餾水1000mL，用過飽和氫氧化鈣調pH值7.2-7.6。?

3.根據權利要求1所述的抗重茬修復三七連作土壤生態菌劑的制備方法，其特征在于所述的發酵過程包括下列工藝步驟：?

(1)、將保存的各斜面菌種先用平板劃線法活化后，挑取單菌落，分別經試管(約10mL)、小三角瓶(100-150mL)到大三角瓶(1000-1500mL)逐級擴大培養制成一級種子液(每株菌各1000-1500mL)；?

(2)、將(1)步驟中制備的一級種子液進行等質量混合，轉接于二級擴大培養液(30-35L)。以5％-10％的接種量接入發酵培養基，進行混合好氧發酵，溫度30℃，攪拌轉速150-200r/min，通氣壓力保持0.05Mpa，發酵培養20-24h，制備成二級種子液；?

(3)、將(2)步驟中制備的二級種子液轉接于三級擴大培養液(300-350L)，?培養基同(2)。以5％-10％的接種量導入發酵培養基進行好氧發酵，溫度30℃，攪拌轉速200-250r/min，通氣壓力保持0.05Mpa，發酵培養20-24h，制備成發酵終產物；發酵終點用分光光度法測定以660nm波長吸光值最大(發酵液稀釋100倍，用滅菌發酵培養基作空白對照)或用血球計數板顯微計數法(稀釋100倍)以菌群數最多為發酵終點。?

4.根據權利要求3所述的抗重茬修復三七連作土壤生態菌劑的制備方法，其特征在于所述的(1)步驟一級種子的制備過程中，枯草芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，多粘芽孢桿菌，糞鏈球菌和細黃鏈霉菌的培養基采用牛肉膏蛋白胨培養基(配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，pH值7.2-7.6，水1000mL)；熱帶假絲酵母和淡紫擬青霉采用馬鈴薯-蔗糖培養基(配方：去皮馬鈴薯200g水煮20-30min，雙層紗布過濾去渣留液，蔗糖20g，用水補足1000mL，自然pH值)。培養條件：溫度為28-30℃，時間為24-48h。?

5.根據權利要求3所述的預防三七重茬病益生菌菌劑的制備方法，其特征在于所述的(1)、(2)、(3)、(4)步驟中的培養基的滅菌條件是：壓力0.1Mpa、溫度121℃、時間30min。?

6.根據權利要求1所述的抗重茬修復三七連作土壤生態菌劑的制備方法，其特征在于所述的吸附菌液的載體選用占發酵終產物總質量4-5倍的草炭生物炭，將發酵終產物-菌液直接噴灑、攪拌于載體上，制備成固體粉末菌劑。?

7.根據權利要求1或6所述的發酵菌劑的制備方法，其特征在于將吸附、固定化于草炭生物炭上制成的發酵固體菌劑密封于內襯聚乙烯膜的包裝袋內。?