[發明專利]抗毒素/抗血清中鋁含量的測定方法

無效

• 申請號: 201310018937.7
• 申請日: 2013-01-18
• 公開（公告）號: CN103076298A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 楊冬;柯武
• 申請（專利權）人: 玉溪九洲生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明涉及一種抗毒素/抗血清中鋁含量的測定方法，屬于生物技術領域。

背景技術

抗毒素/抗血清（Antitoxin/Antiserum）是指采用特定的抗原免疫動物后，再收集高效價免疫血清，并經過提取、純化后，制備出含完整抗體（IgG）或抗體片段[F(ab’)₂]的免疫球蛋白制品，以用于預防和治療各相應疾病引起的感染。隨著歷史的發展，抗毒素/抗血清制品范圍從早期的單純治療細菌外毒素疾病擴展至現在的抗病毒制品，如抗狂犬和天花血清。目前，馬免疫球蛋白在難治病種（狂犬、天花，破傷風、肉毒中毒）、含多種致病成分（蛇毒）、防止生物恐怖和病原學研究不清的疾病等方面具有重要作用。隨著歷史及技術的發展，該制品也從最早的抗血清、抗毒素發展為現在安全性很高的純化動物（馬）特種免疫球蛋白，其活性成分也從血清發展到抗體，進而又發展為免疫球蛋白的F(ab’)₂片段，產品的過敏反應顯著降低。

隨著純化方法的改進，抗毒素/抗血清生產工藝中又有可能接觸諸多的鋁污染源，如：硫酸鋁鉀、水源、助濾物、濾材、濾器、瓶子及膠塞等，導致制品中鋁含量超標。人體攝取過多的鋁將直接破壞神經細胞內遺傳物質脫氧核糖核酸的功能，不僅使老年人易患癡呆病，而且還會使人衰老，引發骨軟化病、低血色素性貧血和慢性腎功能損害等病癥。因此需測定抗毒素、抗血清制品中鋁的含量，從而評價產品質量。

目前測定鋁的方法主要有原子吸收分光光度法、電感耦合等離子體發射光譜法、電感耦合等離子體質譜法等，由于原子吸收分光光度法測定鋁具有簡單、快速的優點，因此它在測定痕量和微量鋁方面獲得了越來越廣泛的應用。原子吸收分光光度法包括火焰原子吸收分光光度法和石墨爐原子吸收分光光度法。火焰原子吸收分光光度法靈敏度低，不適合于痕量分析，而石墨爐原子吸收分光光度法具靈敏度較高，是目前痕量鋁分析的主要方法。抗血清/抗毒素制品中含有蛋白質及氯化鈉等輔料，基體組份復雜，若采用石墨爐原子吸收分光光度法直接分析，基體組份的背景干擾嚴重；若按常規方法對樣品進行消化處理，則樣品用量多，且需多次轉移，易受到污染。目前，抗血清/抗毒素中鋁含量測定的相關方法未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗毒素/抗血清中鋁含量的測定方法，該方法能準確地測定抗毒素/抗血清中鋁含量，并且方法準簡便、快速。

本發明通過下列技術方案實現：一種抗毒素/抗血清中鋁含量的測定方法，其特征在于經過下列步驟：

1）取四份等量的抗毒素、抗血清待測試樣0.1～0.5ml，分別置四個試管中，第1試管不加標準鋁溶液，作為待測試樣，在第2、3、4試管中，分別加入0.4～4.5ml的標準鋁溶液，再用體積濃度為0.1～1%的硝酸溶液稀釋至總體積為2～5ml，混勻，即得到鋁濃度X為0～30ng/ml的四份樣品溶液；

2）用常規原子吸收分光光度計的自動取樣器分別吸取步驟1）的四個樣品溶液，按常規石墨爐原子吸收分光光度法，分別測得四個不同的吸光度Y，根據X與Y的對應關系，得到一線性回歸方程，并將Y?=?0代入該線性回歸方程，計算得到X的絕對值即為第1試管的待測試樣的鋁濃度，乘于稀釋倍數，即得到抗毒素、抗血清中鋁的含量。

所述標準鋁溶液是：將鋁標準溶液（1000μg/ml，國家標準物質）用硝酸溶液溶解稀釋至濃度為25～100ng/ml的標準鋁溶液。

所述石墨爐原子吸收分光光度法的參考測量條件見下表：

本發明的優點和有益效果是：選用體積濃度為0.1%～1%的硝酸溶液作為稀釋介質，將樣品稀釋，并采用標準加入法，在待測樣品中加入標準鋁溶液，稀釋后直接進樣分析，即可改善及消除基體影響，克服血清基體產生的高背景。本發明樣品不需預先經過消化處理和多次轉移等步驟，操作步驟少、簡單，降低了樣品處理過程中的污染和損失。本發明提供的測定抗毒素/抗血清中鋁含量的方法，具有準確、快速、簡便等特點。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明進行詳細說明，但保護范圍不僅限于實施例所述范圍。

實施例1

破傷風抗毒素中鋁含量的測定：

儀器：1、AAnalyst?800型原子吸收分光光度計，Perkin?Elmer公司。

2、旋渦混合器：上海醫科大學儀器廠。