[發(fā)明專利]重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其制備方法與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310018715.5
• 申請日: 2013-01-18
• 公開（公告）號: CN103087996A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設計）人: 封文海;王良海;侯雋;高麗;郭雪坤;余志彬;朱耀華;劉翼浩;唐軍
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N5/10;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發(fā)明涉及一種重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其制備方法與應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome，PRRS）是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome?Virus，PRRSV）感染所導致的病毒性急性傳染病。該病可以感染任何年齡的豬，臨床上以繁殖障礙、呼吸道疾病、哺乳仔豬的高發(fā)病率和高死亡率、持續(xù)性感染和免疫抑制為主要特征，對世界養(yǎng)豬業(yè)產(chǎn)生了極大的危害。2005年的一份報告表明，該病每年給美國養(yǎng)豬業(yè)造成的損失就有5.6億美元，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成的損失將更大。目前，PRRSV已經(jīng)形成全球性大流行，成為影響?zhàn)B豬業(yè)的主要疾病因素之一，給全世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。

PRRSV為單股、正鏈、不分節(jié)段且有囊膜的RNA病毒。病毒粒子呈球形，直徑為45-80nm，有25-35nm的立方體核心?；蚪M全長約15kb，5’末端為具有甲基化的帽子結(jié)構，3’末端為多聚腺甘酸（polyA）尾，包含10個開放閱讀框（Open?Reading?Frame,ORF）。大部分ORF基因結(jié)構末端都和相鄰的ORF有部分重疊，只在編碼非結(jié)構蛋白（non-structural?protein，NSP）的ORF1b和編碼第一個結(jié)構蛋白的ORF2a之間存在1個堿基的間隔。

病毒的復制受到轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（transcription-regulatory?sequences，TRS）的控制，在5’非翻譯區(qū)存在一段前導轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（leader?TRS），在每個ORF前面都有各自的體轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（body?TRS）（如調(diào)控ORF6轉(zhuǎn)錄的TRS命名為TRS6，位于ORF5?3’端、ORF6之前），通過體轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列與前導轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列的結(jié)合完成各個亞基因組mRNA的轉(zhuǎn)錄。

對不同地域的分離株序列分析表明，PRRSV有2種基因型，即歐洲型（代表株為Lelystad病毒，LV）和美洲型（代表株為ATCC?VR-2332株），二者核苷酸的同源性約為60%，血清學特性不同。美洲型毒株之間的差異性較大，而歐洲型毒株之間則相對保守。美洲型和歐洲型毒株雖然在基因組核苷酸序列和血清學上差異很大，但其二者具有相同的復制機制，均可引起相似的臨床癥狀。

2006年5月我國自南方地區(qū)開始爆發(fā)了高致病性（highly?pathogenic，HP）“藍耳病”，主要特征為高熱、食欲下降、藍耳、腹瀉、高發(fā)病率和高死亡率，其波及全國25個省份，經(jīng)濟損失巨大。與傳統(tǒng)毒株感染后只有妊娠母豬和仔豬發(fā)病不同，高致病性PRRSV感染后各種年齡、不同性別的豬群均可發(fā)病，發(fā)病豬體溫升高至41℃以上，精神沉郁，采食量下降或食欲廢絕；耳后耳緣發(fā)紺，呈現(xiàn)“藍耳”，乳頭、外陰、腹部、尾部等肢體末端多處皮膚有紫色斑塊；呼吸困難，部分豬出現(xiàn)嚴重的腹式呼吸，有的表現(xiàn)喘氣或不規(guī)則呼吸；部分患豬鼻分泌物增多，咳嗽、打噴嚏、眼部分泌物增多，出現(xiàn)結(jié)膜炎癥狀；個別病豬瀕死前不能站立，全身抽搐。此次爆發(fā)時豬群發(fā)病率為50-100%，死亡率為20-100%。中國動物疾病控制中心的權威統(tǒng)計表明，截止到2006年9月，此次疫情影響了約212萬頭豬，造成至少40萬頭豬死亡，平均死亡率為19.68%。所有病死豬剖檢后均可見肺腫脹、變硬，部分豬肺伴有出血；所有豬均出現(xiàn)不同程度的肺炎，大多數(shù)都是混合感染肺炎，間質(zhì)明顯增寬，間質(zhì)內(nèi)有大量淋巴細胞浸潤。

已經(jīng)證實其主要病原為NSP2基因部分缺失為特征的高致病性PRRSV（HP-PRRSV）。研究表明，這些分離株在NSP2上均存在30個氨基酸的不連續(xù)缺失。但后來的研究表明，這30個氨基酸的不連續(xù)缺失與高致病性PRRSV的毒力增強并沒有直接關系。高致病性PRRSV毒力增強的具體機制還有待進一步研究。