[發明專利]重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201310018715.5
• 申請日: 2013-01-18
• 公開（公告）號: CN103087996A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 封文海;王良海;侯雋;高麗;郭雪坤;余志彬;朱耀華;劉翼浩;唐軍
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N5/10;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒，是將野生型豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因組RNA進行替換或缺失得到的重組病毒；所述替換為將所述野生型豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因組RNA中的結構蛋白ORF2a、結構蛋白ORF2b、結構蛋白ORF3、結構蛋白ORF4、結構蛋白ORF5a和結構蛋白ORF5這六種結構蛋白的編碼RNA的全部或部分替換為標記蛋白的編碼RNA；所述缺失為將所述野生型豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因組RNA中的所述六種結構蛋白的編碼RNA的全部或部分進行缺失。

2.根據權利要求1所述的重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其特征在于：所述結構蛋白ORF2a的編碼RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1的第11983-12753位；所述結構蛋白ORF2b的編碼RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1的第11988-12209位；所述結構蛋白ORF3的編碼RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1的第12606-13370位；所述結構蛋白ORF4的編碼RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1的第13151-13687位；所述結構蛋白ORF5a的編碼RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1的第13688-13828位；所述結構蛋白ORF5的編碼RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1的第13698-14300位。

3.根據權利要求1或2所述的重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其特征在于：所述標記蛋白為綠色熒光蛋白；所述綠色熒光蛋白的氨基酸序列如序列表中序列3所示。

4.根據權利要求3所述的重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其特征在于：所述綠色熒光蛋白的編碼反轉錄的cDNA序列為序列表中序列2的第11990-12709位。

5.根據權利要求1-4中任一所述的重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其特征在于：所述野生型豬繁殖與呼吸綜合征病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒HV株；所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒HV株的基因組RNA反轉錄的cDNA序列為序列表中序列1。

6.根據權利要求1-5中任一所述的重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其特征在于：所述重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因組RNA反轉錄的cDNA序列如下：將序列表中序列2的第12716-15057位替換為序列2的第12716-12755位或序列2的第15018-15057位，序列2的其他核苷酸不變。

7.制備權利要求6所述重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒的方法，包括如下步驟：

（1）將序列表中序列2所示的DNA片段克隆至真核表達載體中，得到重組載體；

（2）用步驟（1）的重組載體轉染哺乳動物細胞，從而獲得所述重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述真核表達載體為pcDNA3.1(+)；

所述哺乳動物細胞為293FT細胞或293T細胞。

9.權利要求1-6所述的重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒在如下（a）-（c）中的應用：

（a）制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗；

（b）制備預防或治療豬繁殖與呼吸綜合征的藥物；

（c）制備診斷或檢測豬繁殖與呼吸綜合征的產品。

10.如下（a1）或（a2）的生物材料：

（a1）含有權利要求1-6中任一所述重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒的離體動物細胞或重組菌；

（a2）含有權利要求1-6中任一所述重組豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因組RNA或cDNA的載體。