[發明專利]環介導等溫擴增檢測金魚造血器官壞死病毒的方法及引物

有效

• 申請號: 201310016336.2
• 申請日: 2013-01-16
• 公開（公告）號: CN103088163A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 何俊強;鄭曉聰;賈鵬;史秀杰;劉葒;蘭文升;王津津;于力
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 羅瑤

技術領域

本申請涉及核酸分子檢測領域，特別是涉及一種用于金魚造血器官壞死病毒環介導等溫擴增檢測的引物，以及基于該引物建立的非診斷目的的金魚造血器官壞死病毒的環介導等溫擴增檢測方法。

背景技術

金魚造血器官壞死病毒（Goldfish?Haematopoietic?Necrosis?Virus，簡寫GFHNV）又稱皰疹病毒性造血器官壞死病病毒（HerpsviralHaematopoietic?Necrosis?Virus，HVHNV），因該病是第二個分離自鯉科魚類的皰疹病毒，按照國際病毒系統分類委員會的系統命名規則，正式命名為鯉科皰疹病毒-2型（Cyprinid?herpescirus2,CyHV-2）。由于對該病的研究較少，缺乏相關的檢疫制度，觀賞金魚的國際貿易加快了該病在世界范圍內傳播，給金（鯽）魚養殖業造成破壞性影響。

環介導等溫擴增法(loop-mediated?isothermal?amplification,LAMP)是2000年開發的一種新穎的恒溫核酸擴增方法，其特點是針對靶基因的6個區域設計4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶在等溫條件，約63℃左右，保溫30－60分鐘，即可完成核酸擴增。與常規PCR相比，不需要模板的熱變性、溫度循環、電泳及紫外觀察等過程。LAMP是一種全新的核酸擴增方法，具有簡單、快速、特異性強的特點。該擴增方法的核心在于巧妙的引物設計，目前尚沒有關于金魚造血器官壞死病毒的LAMP檢測方法及相關引物。

發明內容

本申請的目的是提供一種能夠用于金魚造血器官壞死病毒環介導等溫擴增檢測的引物，以及基于該引物的試劑盒和金魚造血器官壞死病毒的環介導等溫擴增檢測方法。

本申請的一方面公開了一種用于金魚造血器官壞死病毒環介導等溫擴增檢測的引物，該引物選自引物組1-5中的至少一組，引物組1包括Seq?ID?No.1所示序列的上游外部引物、Seq?ID?No.2所示序列的下游外部引物、Seq?ID?No.3所示序列的上游內部引物、Seq?ID?No.4所示序列的下游內部引物；引物組2包括Seq?ID?No.5所示序列的上游外部引物、Seq?ID?No.6所示序列的下游外部引物、Seq?ID?No.7所示序列的上游內部引物、Seq?ID?No.8所示序列的下游內部引物；引物組3包括Seq?ID?No.9所示序列的上游外部引物、Seq?ID?No.10所示序列的下游外部引物、Seq?ID?No.11所示序列的上游內部引物、Seq?ID?No.12所示序列的下游內部引物；引物組4包括Seq?ID?No.13所示序列的上游外部引物、Seq?ID?No.14所示序列的下游外部引物、Seq?ID?No.15所示序列的上游內部引物、Seq?ID?No.16所示序列的下游內部引物；引物組5包括Seq?ID?No.17所示序列的上游外部引物、Seq?ID?No.18所示序列的下游外部引物、Seq?ID?No.19所示序列的上游內部引物、Seq?ID?No.20所示序列的下游內部引物。

進一步的，所述引物組1還包括Seq?ID?No.21所示序列的上游環形引物和Seq?ID?No.22所示序列的下游環形引物；所述引物組2還包括Seq?ID?No.23所示序列的上游環形引物和Seq?ID?No.24所示序列的下游環形引物；所述引物組3還包括Seq?ID?No.25所示序列的上游環形引物和Seq?ID?No.26所示序列的下游環形引物；所述引物組4還包括Seq?ID?No.27所示序列的上游環形引物和Seq?ID?No.28所示序列的下游環形引物；所述引物組5還包括Seq?ID?No.29所示序列的上游環形引物和Seq?ID?No.30所示序列的下游環形引物。

本申請還公開了本申請提供的引物在金魚造血器官壞死病毒檢測中的應用。

本申請的另一面還公開了一種用于金魚造血器官壞死病毒環介導等溫擴增檢測的試劑盒，該試劑盒中含有本申請提供的用于金魚造血器官壞死病毒環介導等溫擴增檢測的引物。

進一步的，試劑盒中包括環介導等溫擴增的反應液，該反應液中含有鏈置換型DNA聚合酶。

進一步的，反應液中含有熒光染料。

本申請還公開了本申請的試劑盒在金魚造血器官壞死病毒檢測中的應用。

本申請的再一面公開了一種金魚造血器官壞死病毒的環介導等溫擴增檢測方法，該檢測方法包括利用本申請提供的引物，以金魚造血器官壞死病毒DNA為模板進行環介導等溫擴增。