[發明專利]一種基于藥物交聯的多聚糖微球的制備方法

無效

• 申請號: 201310016152.6
• 申請日: 2013-01-16
• 公開（公告）號: CN103054814A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 談華平
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: A61K9/16
• 分類號: A61K9/16;A61K47/36;A61K31/7056
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 朱顯國

技術領域

本發明屬于生物醫用高分子材料領域，具體涉及一種利用藥物交聯制備多聚糖微球的方法。

背景技術

具有生物降解性能的微球材料可用于藥物、蛋白或基因的包埋和釋放，目前已廣泛用于藥物控釋、組織工程和再生醫學等領域的研究。選擇合適的微球體系，可實現藥物在體內的緩慢釋放，達到理想的治療效果。在組織工程和再生醫學領域，微球常用于包埋細胞生長因子和基因，提高細胞支架的生物活性，增加支架在體內的組織誘導能力。天然多聚糖具有優異的生物相容性和可調的生物降解性，是制備微球的理想基體材料。常用的多聚糖包括：透明質酸、海藻酸、殼聚糖、硫酸軟骨素、纖維素等。

多聚糖微球在制備過程中必須經過交聯處理，其結構才能穩定，目前普遍使用的方法是添加化學交聯劑，比如多聚甲醛、戊二醛、水溶性碳化二亞胺和京尼平等，其作用是將多聚糖分子中的活性基團（氨基、羧基和羥基）經過縮合而達到交聯的目的。但是，現有的化學交聯劑均有不同程度的化學毒性，交聯過程一方面會改變材料的分子結構而使材料變性，另一方面容易導致包埋的細胞生長因子變性而失活。此外，未參與作用的交聯劑不容易被清除，會造成殘留而增加材料的毒性。如能避免使用化學交聯劑，則有望得到高生物活性的多聚糖微球材料，這是降低材料毒性和提高藥物輸送效率的有效途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用藥物交聯制備多聚糖微球的方法，其采用反相乳液交聯技術，通過藥物交聯來制備透明質酸微球，避免使用有毒化學交聯劑，從而保證微球的生物相容性。

實現本發明目的的技術解決方案為：以透明質酸為基體材料，采用反相乳液交聯技術，具體包括以下步驟：

步驟1、室溫下配制透明質酸水溶液，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，攪拌均勻，進行活化；

步驟2、配制促旋酶溶液，將其滴加至活化后的透明質酸溶液中，攪拌反應，透析后凍干，得到促旋酶功能化透明質酸；

步驟3、將步驟2所凍干的促旋酶功能化透明質酸溶于水中，形成促旋酶功能化透明質酸水溶液，再將其加于石蠟油中，并加入司班80，超聲乳化，形成乳化液；

步驟4、將步驟3得到的乳化液中加入香豆霉素水溶液，繼續超聲乳化；

步驟5、將步驟4得到的乳化液攪拌揮發過夜，然后將乳液倒入異丙醇中析出微球，隨后用異丙醇、正己烷和丙酮分別清洗，最后室溫真空干燥。

原料和試劑：透明質酸、促旋酶、香豆霉素、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，購于Sigma公司；司班80、分析純，南京化學試劑有限公司；異丙醇、正己烷、丙酮，分析純，上海化學試劑有限公司；氯化鈉、氯化鉀，分析純，上海試劑三廠；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，分析純，杭州化學試劑有限公司。

磷酸鹽緩沖溶液（PBS）的配制：稱取分析純氯化鈉8克、氯化鉀0.2克、磷酸氫二鈉2.9克、磷酸二氫鉀0.2克，溶于1000毫升蒸餾水中，調節pH為7.4。

本發明采用ANOVA方差分析法，顯著差異值p設為≤0.05。

與現有技術相比，本發明的特征在于：1）避免使用了有毒化學交聯劑，因此微球中不存在毒性殘留，保留了多聚糖的天然活性，保證了微球材料的使用安全性；2）所涉及的藥物交聯作用，不與被包埋活性藥物發生化學反應，能有效保護藥物的生物活性，特別適用于細胞生長因子類活性蛋白的包埋與傳遞；3）本發明工藝和設備簡單、易行、操作安全，具有制備溫度低、固化速度快、處理周期短、對環境不產生污染等優點，適合商業化生產。

下面通過實施例來進一步說明本發明。

附圖說明

圖1是透明質酸微球制備示意圖。???????????????????????????????????????????????????????????????????????

圖2是成球率與促旋酶/香豆霉素配比的關系

圖3為微球的掃描電子圖。

圖4是微球直徑與促旋酶功能化透明質酸濃度的關系。

圖5是微球直徑與香豆霉素濃度的關系。

圖6是不同直徑的微球在37^oC下磷酸鹽緩沖溶液中的失重。

具體實施方式

一種利用藥物交聯制備多聚糖微球的方法，具體包括以下步驟：

步驟1、室溫下配制100毫升質量/體積濃度為0.5~1%的透明質酸水溶液，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，其質量為透明質酸的1/10~1/4，攪拌均勻，37^oC下活化0.5~1小時；