[發(fā)明專利]一種檢測(cè)甘蔗褐銹病菌或黃銹病菌的PCR方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310015703.7
• 申請(qǐng)日: 2013-01-16
• 公開（公告）號(hào): CN103060456A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 闕友雄;郭晉隆;張玉葉;許莉萍;黃寧;羅俊;高世武;陳如凱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種檢測(cè)甘蔗褐銹病菌或黃銹病菌的PCR方法，包括基因組DNA的提取、PCR檢測(cè)體系建立和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)，其特征在于：?

（1）PCR檢測(cè)體系的建立：PCR擴(kuò)增體系為總體積25?μl，內(nèi)含2.5?μl?10×PCR緩沖液，2.5?μl?25?mmol/L?MgCl₂，0.5?μl?10?mmol/L?dNTP，10?μmol/L?的檢測(cè)引物PCR-F和PCR-R各1.0?μl，1.25?U?Taq?DNA?Polymerase，20-30?ng基因組DNA，ddH₂O補(bǔ)足到25?μl；PCR擴(kuò)增程序如下：94?℃?4?min；94?℃?1?min，56?℃?45?s，72?℃?1?min，35個(gè)循環(huán)；72?℃8?min；所述10×PCR緩沖液組成成分為100?mmol/L?pH8.5?Tris-HCl，500?mmol/L?KCl和15?mmol/L?MgCl₂；所述檢測(cè)引物如下：?

PCR-F：5'-?GAGCATCAAGGAAAGTAGCAA?-3′，

PCR-R：5'-?GAAGATGGTTCGAGCCACAATT?-3'；

（2）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)：瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)的PCR擴(kuò)增圖譜中，在分子量為585?bp的位置出現(xiàn)DNA條帶，為甘蔗褐銹病菌存在的標(biāo)志；在分子量為606?bp的位置出現(xiàn)DNA條帶，為甘蔗黃銹病菌存在的標(biāo)志。