[發明專利]吡唑-酰腙類化合物的制備及其在抗癌治療中的應用

在審

• 申請號: 201310014840.9
• 申請日: 2013-01-16
• 公開（公告）號: CN103086972A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 朱海亮;趙婷婷;邢曼
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C07D231/12
• 分類號: C07D231/12;A61K31/415;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及吡唑-酰腙類化合物及其制備方法與抗癌治療中的應用。

背景技術

端粒酶是一種核蛋白逆轉錄酶，可以合成染色體末端的端粒，使得因每次細胞分裂而逐漸縮短的端粒長度得以補償，進而保證染色體的完整性。其活性在成體的大多數體細胞中被抑制，而在腫瘤細胞中被重新激活，保持端粒長度，從而使得腫瘤細胞無休止的增殖。近年有關端粒酶與腫瘤關系的研究表明，在腫瘤細胞中端粒酶還參與了對腫瘤細胞的凋亡和基因組穩定的調控過程。因此，抑制腫瘤細胞中端粒酶的活性將成為腫瘤治療的重要途徑和有效手段。

近年，X-射線衍射晶體學揭示了端粒酶活性部位由人類端粒酶RNA(hTR)和人類端粒酶逆轉錄酶(hTERT)催化亞基兩個主要部分，以及許多端粒酶相關蛋白等組成，這將為端粒酶抑制劑提供重要作用靶點。

研究發現，許多含吡唑結構的端粒酶抑制劑表現出顯著端粒酶抑制作用。例如，VER49009通過間接抑制端粒酶與相關蛋白的結合，從而導致端粒的去帽保護與細胞凋亡。另外，文獻報道，酰胺基團作為主要結構骨架存在于多種端粒酶抑制性抗癌藥物中。例如，BIBR1532是至今為止最有希望的hTERT特異性抑制劑，作為端粒酶非競爭性抑制劑，特異性地阻止DNA鏈的延伸。再者，由于腙的衍生物的特殊結構，尤其酰腙類衍生物，其表現出顯著的配位性與配位多樣性。一方面，酰腙基團可以與金屬離子形成配合物，從而阻止由該金屬離子催化的生理反應，或者促進藥物在體內的吸收、轉移、分配與代謝等；另一方面，酰腙基團可能與靶蛋白或DNA形成疏水相互作用和氫鍵，從而抑制細胞增殖。

正是基于以上多種基團的藥效及其配伍研究，我們設計并合成了20種吡唑-酰腙類衍生物(15個化合物未經報道)，并對其進行生物藥效評價，推斷這些新化合物可能表現出吡唑、酰胺和酰腙類化合物在抗癌作用中的協同性。我們測試了這批化合物的活性，并發現其對MCF7和B16-F10具有良好的抑制作用，且能有效抑制端粒酶活性從而阻止細胞周期，誘導細胞凋亡。

發明內容

本發明的目的在于提供一類新型吡唑-酰腙類化合物以及它們的制備方法與用途。

本發明的技術方案如下：

1.一類吡唑-酰腙類衍生物1e-20e，其特征是它有如下通式：

結構式中R1為：氟、氯、氫、甲氧基、甲基；

R2為：氫、甲基；

R3為：氯、溴、氫。

2.一種制備上述吡唑-酰腙類衍生物的方法，它由下列步驟組成：

步驟1.制備希夫堿(化合物a)：

將乙酸鈉(40mmol)加入到取代基苯乙酮(20mmol)與鹽酸苯肼(25mmol)的乙醇溶液中，磁力攪拌，于50-60℃反應約3h，(TLC檢測反應進行程度)，產物以固體析出。反應結束后抽濾，并以無水乙醇沖洗固體物3次，干燥得取代基希夫堿(化合物a)。用無水乙醇將產物重結晶。

步驟2.制備吡唑-醛類衍生物(化合物b)：

將步驟1所得產物加入到冰的DMF(10ml)溶液中，隨后再逐滴加入POCl3(8ml)，磁力攪拌，于50-60℃反應約6h(TLC檢測反應進行程度)；待反應結束，將反應體系倒入冰水中，并用氫氧化鈉飽和溶液調節pH至中性，產物將以沉淀析出，真空抽濾后進行水洗，干燥，最后利用乙醇溶液進行重結晶，即得產物b。

步驟3.二氯亞砜成酯法制備水楊酸甲酯類衍生物(化合物c)：

將水楊酸溶于甲醇中，放置于冰浴，向體系內逐滴加入SOCl₂(約1.5eq)，加畢，于冰浴中反應30-1h，然后放置于常溫下，反應大概2-3h，轉移到45℃，反應過夜(TLC檢測反應進行程度)；待反應結束，用旋轉蒸發儀抽去甲醇及SOCl2，用乙酸乙酯與飽和NaHCO3萃取，旋轉蒸發儀抽去萃取液，最后用乙醇重結晶，即得產物c。

步驟4.制備酰肼類衍生物(化合物d)：

將產物c溶解于乙醇中，逐滴加入80％水合肼，磁力攪拌，反應回流過夜(TLC檢測反應進行程度)；待反應結束，用旋轉蒸發儀抽去溶劑直到沉淀析出，然后向其中加入水，靜置，沉淀將大量析出，即得產物d。

步驟5.制備終產物：吡唑-酰腙類衍生物(化合物1e-20e)：