[發明專利]人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法

有效

• 申請號: 201310012434.9
• 申請日: 2013-01-14
• 公開（公告）號: CN103087184A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 周滿祥;楊向有;申云飛;張慧蘭
• 申請（專利權）人: 山西康寶生物制品股份有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/22
• 代理公司: 太原華弈知識產權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

技術領域

本發明涉及人血白蛋白制品的制備方法，具體是涉及一種人血白蛋白生產過程中激肽釋放酶原激活劑（PKA）含量的控制方法。

背景技術

人血白蛋白是以經乙型肝炎疫苗免疫的健康人血漿為原料，經低溫乙醇法分離而成。健康人血漿是一種極為復雜的蛋白混合物，其中，血漿中的凝血因子Ⅻ是以無活性的酶原形式存在的，血管內皮細胞受損時，露出的帶負電荷的膠原纖維可以激活凝血因子Ⅻ變成活化因子Ⅻɑ，活化因子Ⅻɑ能激活激肽釋放酶原（PK）生成激肽釋放酶（K_K），K_K使激肽原釋放出緩激肽，這些活化的因子片段被稱為激肽釋放酶原激活劑（PKA）。人血白蛋白制品的反復融化和冰凍會導致制品中蛋白組份變性，可使PKA升高。

當含有PKA較多的人血白蛋白制品用于人體靜脈快速輸注時，PKA可以激活人體內的前激肽釋放酶，生成激肽釋放酶，導致激肽產生，引起毛細血管通透性增加、血管舒張、血壓下降、面色潮紅、頭疼、心悸、呼吸困難等不良反應。因此，檢測血液制品中的PKA含量，并規定其限量是很有必要的?！吨袊幍洹分幸幎巳搜椎鞍字破分屑る尼尫琶冈せ顒≒KA）的含量應不高于35IU/ml。

現通行的血漿低溫乙醇法分離工藝為：1)、原料血漿合并融化；2)、調整蛋白濃度4.0±0.5%、乙醇含量20±1%、pH值6.80±0.10、溫度－4.5±0.5℃，攪拌，壓濾分離，收集組分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀；3)、分離沉淀后的組分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ上清液調整蛋白濃度1.25～1.50%、乙醇含量40±1%、pH值5.85±0.05、溫度－4.5±0.5℃；攪拌，壓濾分離，收集組分Ⅳ沉淀；4)、分離沉淀后的組分Ⅳ上清液調整蛋白濃度1.0～1.2%、乙醇含量40±1%、pH值4.80±0.10、溫度－8.0±0.5℃；攪拌，壓濾分離，收集組分Ⅴ沉淀；5)、將組分Ⅴ沉淀以6～8倍沉淀體積的2～4℃10%乙醇溶液攪拌溶解，過濾，濾液應澄清，無纖維等異物；6)、透析脫醇、濃縮、配液，60±0.5℃、10小時病毒滅活處理。

現有的血漿低溫乙醇分離方法因原料血漿保存不當等其他原因，容易出現人血白蛋白制品中PKA過高的現象，常規的方法是將制品反復加熱，對PKA進行滅活。然而，反復的加熱過程對人血白蛋白制品造成了潛在的威脅。

發明內容

本發明的目的是針對目前人血白蛋白制品分離過程中容易出現激肽釋放酶原激活劑過高的問題，提供一種人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法。

本發明人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法包括在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的工藝中，所述人血白蛋白低溫乙醇法分離制備工藝為常規工藝，本發明是在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的過程中增加下述兩步工藝：

1）、利用活化硅藻土對凝血因子Ⅻ的吸附作用，在從組分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ上清液中分離組分Ⅳ的步驟中加入經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土，對凝血因子Ⅻ進行吸附，以降低凝血因子Ⅻ含量；

2）、將超濾透析純化后的組分Ⅴ通過帶正電荷的除脂濾芯，靜電吸附除去殘留在人血白蛋白溶液中的活化因子Ⅻɑ片段；

通過以上兩步工藝，降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑含量。

其中，所述經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土采用以下步驟制備：

1）、將硅藻土加入2g/L的枸櫞酸鈉水溶液中，攪拌5～10分鐘，混懸，靜置3～5分鐘，去除懸浮物和上清；

2）、用不加枸櫞酸鈉的水重復上述操作，反復抽干，至洗液pH值呈中性；

3）、再加入體積百分濃度0.025%的冰醋酸水溶液，攪拌5～10分鐘，混懸，靜置3～5分鐘，抽干得固體；

4）、用水反復洗滌固體，至洗液pH值呈中性，抽干得到活化硅藻土，冷藏保存。

以上使用的水均為20～30℃的注射用水。

進而，本發明從組分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ上清液中分離組分Ⅳ的具體分離條件為：調整上清液的pH值5.91～5.94，蛋白質量濃度1.0～1.5%，離子強度0.1，溫度－4～－5℃，乙醇體積濃度40～42%，加入活化硅藻土，使其在上清液中的濃度為5～8g/L，以60～120轉/分的速度攪拌30～60分鐘。

本發明將上述上清液以濾板壓濾分別得到組分Ⅳ沉淀和組分Ⅳ上清液。其中，壓濾采用pall公司的50P濾板，所需濾板面積為5～8平方米/噸血漿，過濾壓力控制在0～3.0bar。