[發明專利]一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法

無效

• 申請號: 201310011875.7
• 申請日: 2013-01-14
• 公開（公告）號: CN103048361A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 劉佩;付冠艷;楊麗霞;李樂;劉彥哲;彭新凱;蔣健暉
• 申請（專利權）人: 長沙市食品質量安全監督檢測中心;湖南省食品安全生產工程技術研究中心
• 主分類號: G01N27/04
• 分類號: G01N27/04
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 馬強

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法。

背景技術

沙丁胺醇(Sal)是β興奮劑類物質的一種，可促進畜禽生長。由于β興奮劑類物質易在畜禽臟器中積聚殘留，并可通過食物鏈進入人體，嚴重危害人類健康，歐盟、美國、中國等國家和地區都先后立法禁止在畜禽生產中使用β興奮劑類物質作為飼料添加劑。

沙丁胺醇的檢測方法主要有：高效液相色譜-質譜聯用法(HPLC-MS)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)和酶聯免疫吸附法(ELISA)等。在各種檢測方法中，ELISA檢測法適合應用于大批樣品的檢測，該法具有快速、操作簡單和一次檢測樣品量大等優點，而且可以直接用于飼料、尿液、血液樣品進行檢測，但假陽性過高。HPLC和GC/MS方法均需要昂貴的儀器、復雜的樣品處理程序以及專門的操作技能，且比較費時，因此不適合用作大批樣品的檢測。目前，進行檢測時，一般應用ELISA試劑盒進行篩檢，再用其他方法對陽性樣品進行確認，從而可確保檢測結果的可靠性。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提出一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法，可實現對動物源性樣品中沙丁胺醇的快速、高效的檢測。

為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法，包括如下內容：在微間隙陣列電極上固定沙丁胺醇-牛血清白蛋白（以下簡稱SAL-BSA），將動物源性樣品與SAL單克隆抗體混合后加在微間隙陣列電極上，動物源性樣品中的SAL與微間隙陣列電極上的SAL-BSA競爭SAL單克隆抗體；然后依次加入堿性磷酸酶標記的二抗和銀沉積溶液；測定微間隙陣列電極的電導率，再根據微間隙陣列電極的電導率測定動物源性樣品中SAL的濃度。

所述方法具體包括如下步驟：

（1）標準工作曲線制作：

取等體積的濃度分別為0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、25.0ng/mL、125.0ng/mL、250.0ng/mL的SAL標準品，將上述各SAL標準品分別與SAL單克隆抗體混合后加入到微間隙陣列電極上，37℃反應0.5～1.5h，SAL標準品SAL單克隆抗體混合物中SAL標準品與SAL單克隆抗體的體積相等，加入的SAL與固定在微間隙陣列電極表面的SAL-BSA競爭SAL單克隆抗體，未反應的SAL單克隆抗體被固定在微間隙陣列電極上，形成BSA-SAL-單抗復合物；然后在微間隙陣列電極上加入與SAL標準品SAL單克隆抗體混合物等體積的稀釋好的堿性磷酸酶標記的二抗，37℃反應25～35min，酶標二抗被固定到電極上，形成BSA-SAL-單抗-二抗復合物；再在微間隙陣列電極上加入銀增強溶液37℃避光反應10～20min，堿性磷酸酶(AP)催化抗壞血酸磷酸酯(AAP)水解生成的抗壞血酸，將Ag⁺還原成Ag單質，從而增大了微間隙陣列電極的電導率，洗凈吹干后將微間隙陣列電極一端與CHI760B型電化學工作站的工作電極連接，CHI760B型電化學工作站的對電極與CHI760B型電化學工作站的參比電極復合后再與微間隙陣列電極的另一端連接（CHI760B型電化學工作站有三個電極，包括：工作電極、對電極、參比電極，微間隙陣列電極只有正、負兩端，因此在檢測的過程中，需要將對電極和參比電極復合，然后與微間隙陣列電極的一端相連）；采用線性掃描伏安法在0-50mV電位范圍檢測，記錄微間隙陣列電極電流隨電位變化的響應曲線，并計算其電導值，所述響應曲線的橫坐標為電壓，縱坐標為電流，電導值=電流/電壓；根據不同濃度的SAL標準品對應的微間隙陣列電極的電導值獲得標準工作曲線，所述標準工作曲線的橫坐標為SAL的濃度，單位為ng/ml，縱坐標為1-S/S₀，S₀為檢測空白樣品的電導值，S為檢測含不同濃度SAL標準品的電導值；