[發明專利]一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法

無效

• 申請號: 201310011875.7
• 申請日: 2013-01-14
• 公開（公告）號: CN103048361A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 劉佩;付冠艷;楊麗霞;李樂;劉彥哲;彭新凱;蔣健暉
• 申請（專利權）人: 長沙市食品質量安全監督檢測中心;湖南省食品安全生產工程技術研究中心
• 主分類號: G01N27/04
• 分類號: G01N27/04
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 馬強

1.一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法，其特征在于，所述方法為：在微間隙陣列電極上固定SAL-BSA，將動物源性樣品與SAL單克隆抗體混合后加在微間隙陣列電極上，動物源性樣品中的SAL與微間隙陣列電極上的SAL-BSA競爭SAL單克隆抗體；然后依次加入堿性磷酸酶標記的二抗和銀沉積溶液；測定微間隙陣列電極的電導率，再根據微間隙陣列電極的電導率測定動物源性樣品中SAL的濃度。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟：

（1）標準工作曲線制作：

a)取等體積的濃度分別為0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、25.0ng/mL、125.0ng/mL、250.0ng/mL的SAL標準品，將上述各SAL標準品分別與SAL單克隆抗體混合后加入到微間隙陣列電極上，37℃反應0.5～1.5h，SAL標準品SAL單克隆抗體混合物中SAL標準品與SAL單克隆抗體的體積相等；

b)然后在微間隙陣列電極上加入與SAL標準品SAL單克隆抗體混合物等體積的稀釋好的堿性磷酸酶標記的二抗，37℃反應25～35min；

c)再在微間隙陣列電極上加入銀增強溶液37℃避光反應10～20min，洗凈吹干；

d)將微間隙陣列電極一端與CHI760B型電化學工作站的工作電極連接，CHI760B型電化學工作站的對電極與CHI760B型電化學工作站的參比電極復合后再與微間隙陣列電極的另一端連接；

e)采用線性掃描伏安法在0-50mV電位范圍檢測，記錄微間隙陣列電極電流隨電位變化的響應曲線，并計算其電導值，所述響應曲線的橫坐標為電壓，縱坐標為電流，電導值=電流/電壓；

f)根據不同濃度的SAL標準品對應的微間隙陣列電極的電導值獲得標準工作曲線，所述標準工作曲線的橫坐標為SAL的濃度，單位為ng/ml，縱坐標為1-S/S₀，S₀為檢測空白樣品的電導值，S為檢測的含不同濃度SAL標準品的電導值；

（2）檢測動物源性樣品中的SAL：

a)取動物源性樣品，將樣品與其等體積的SAL單克隆抗體混合后加入到微間隙陣列電極上，37℃反應0.5～1.5h；

b)然后在微間隙陣列電極上加入與樣品SAL單克隆抗體混合物等體積的稀釋好的堿性磷酸酶標記的二抗，37℃反應0.5～1.5h；

c)再在微間隙陣列電極上加入銀增強溶液37℃避光反應10～20min，洗凈吹干；

d)按照步驟（1）同樣的步驟將微間隙陣列電極與CHI760B型電化學工作站連接，并計算微間隙陣列電極的電導值；

e)再根據該電導值與標準工作曲線比對，求得樣品中SAL的濃度。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，在制作標準工作曲線前對微間隙陣列電極進行預處理：用無水乙醇清洗微間隙陣列電極；將微間隙陣列電極浸入1M的NaOH溶液中25～35min，然后用超純水清洗該微間隙陣列電極，吹干；再將微間隙陣列電極浸入SAL-BSA溶液中，4℃過夜后用超純水清洗微間隙陣列電極，吹干，于4℃保存。

4.如權利要求1至3任一項所述的方法，其特征在于，所述微間隙陣列電極由常規光刻印刷法制作。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述微間隙陣列電極為叉指式雙電極，正負電極均為兩個梳形金電極，梳形金電極的梳齒寬為80～120μm，梳齒間隙為15～25μm。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述梳形金電極的梳齒寬為100μm，梳齒間隙為20μm。