[發明專利]一種通過染色體加倍誘變和篩選小球藻高產新種質的方法

在審

• 申請號: 201310011116.0
• 申請日: 2013-01-14
• 公開（公告）號: CN103060308A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 蔣立科;盧文軒;楊坤
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院水產研究所;合肥匯科農業科技開發有限公司;盧文軒
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過染色體加倍誘變和篩選創造小球藻高產新種質的方法，包括以下步驟：

（1）前培養：對液體原藻種進行誘變前的活化適應培養；

（2）誘變處理：配制小球藻誘變劑梯度濃度培養液，培養不同時間進行誘變處理；

（3）初篩和恢復培養：每一時間水平誘變處理結束后，在培養液中進行恢復培養，分別篩選小球藻濃度峰值出現時間最早和峰值最大的實驗組；

（4）優勢突變型小球藻純藻株的篩選和純化培養：運用涂布平板法，將初篩獲得的小球藻轉接到固體分離培養基進行分離培養，篩選優勢突變藻株并進行連續多代的純化培養；

（5）對分離的優勢突變小球藻株進行生理性能檢測。

2.根據權利要求1所述的通過染色體加倍誘變和篩選創造小球藻高產新種質的方法，其特征在于，其中步驟（1）所述的前培養條件是：原藻種于27?℃±1?℃、光照強度30001ux、光照周期12h∶12h條件下液體培養至穩定期。

3.根據權利要求1所述的通過染色體加倍誘變和篩選創造小球藻高產新種質的方法，其特征在于，其中步驟（2）所述的誘變處理方法是：在HB-4培養液中添加不同濃度秋水仙堿，制成0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%?6個濃度梯度的小球藻誘變培養液，接種原藻種后于溫度27?℃±1?℃、140r/min、光照強度3000lux、光照周期12h∶12h條件下，分別培養6?h、12?h、24?h、36?h、48?h、60?h、72?h、84?h、96?h、120h。

4.根據權利要求1所述的通過染色體加倍誘變和篩選創造小球藻高產新種質的方法，其特征在于，其中步驟（3）所述的初篩和恢復培養方法是：誘變后的藻細胞接種到HB-4液體培養基于27℃±1?℃、140～170r/min、光照強度30001ux、光照周期為12h∶12h、通氣條件下恢復培養，以OD_530nm峰值出現最早和峰值最大的實驗組為優勢突變組。

5.根據權利要求1所述的通過染色體加倍誘變和篩選創造小球藻高產新種質的方法，其特征在于，其中步驟（4）所述的優勢突變型小球藻純藻株的篩選和純化培養方法為：在HB-5固體分離培養基上，挑選色澤濃綠、半徑大的藻株群落，轉接到試管內HB-4固體斜面培養基上純化培養。

6.根據權利要求1所述的通過染色體加倍誘變和篩選創造小球藻高產新種質的方法，其特征在于，其中步驟（5）所述的優勢突變小球藻株生理性能檢測是按下列指標進行：

①小球藻核及葉綠體DNA含量檢測；

②小球藻葉綠素含量檢測；

③小球藻穩定期藻細胞濃度測定；

④小球藻胞內可溶性蛋白質含量鑒定；

⑤小球藻水質凈化效能鑒定。