[發明專利]包含FYN激酶的修飾的SH3結構域的特異性的且高親和力的結合蛋白

無效

• 申請號: 201310010977.7
• 申請日: 2007-08-20
• 公開（公告）號: CN103087172A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: D.格拉布洛夫斯基;D.內里
• 申請（專利權）人: 瑞士聯邦蘇黎世技術大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K19/00;C12N15/12;C12N15/62;C12N15/63;A61K38/17;A61K47/48;A61P35/00;G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍

本申請是國際申請日為2007年8月20日的國際申請PCT/EP2007/007324進入中國、申請號為200780030974.2的題為“包含FYN激酶的修飾的SH3結構域的特異性的且高親和力的結合蛋白”的發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及包含FYN激酶的Src同源性3結構域(SH3)的至少一種衍生物的重組結合蛋白，其中在src環中或位于src環附近最高達2個氨基酸的至少一個氨基酸和/或在RT環中或位于RT環附近最高達2個氨基酸的至少一個氨基酸被置換、缺失或添加。此外，本發明涉及融合蛋白，其包含與藥學上和/或診斷上的活性組分融合的根據本發明的結合蛋白。另外，本發明涉及編碼這些結合蛋白和/或融合蛋白的核苷酸以及對應的載體和宿主細胞。最后、但不是最少，本發明涉及本發明的結合蛋白和/或融合蛋白用于制備藥物或診斷工具的用途，以及包含所述結合蛋白和/或融合蛋白的藥物或診斷組合物。

背景技術

特異性的且高親和力的粘合劑是生物和醫學研究必不可少的工具，且也具有用于醫學診斷、預防和治療的效用。目前，單克隆抗體是可以就與事實上任意靶的高親和力和特異性快速分離的主要結合分子種類。但是，免疫球蛋白具有主要基于它們的一般生物物理學性質和它們的相當復雜的分子結構的限制。因此，在二十世紀九十年代幾個研究組已經采用小球形蛋白作為抗體的替代品。該概念的要旨是，通用結合位點從抗體結構轉移到替代蛋白構架，即所謂的支架。到目前為止已經描述了超過40種支架，其中有2種SH3結構域，即Abl和Src激酶的SH3結構域(參見Binz等人，Nature?Biotechnology，Vol.23，No.10，1257-1268，2005)。

在許多參與細胞內信號傳導和細胞骨架組構的不同蛋白中發現了SH3結構域(Cohen等人，″Modular?binding?domains?in?signal?transductionproteins.″Cell?80(2)：237-48，1995)。盡管它們的一級結構存在可變性，但這些SH3結構域共有非常類似的總體結構和結合共有作為天然SH3結合的關鍵決定子的最小共有序列PxxP的蛋白的模式。SH3結構域的重要功能是參與高選擇性的蛋白-蛋白相互作用。

Erpel等人(″Mutational?analysis?of?the?Src?SH3domain：the?sameresidues?of?the?ligand?binding?surface?are?important?for?intra-andintermolecular?interactions.″Embo?J.14(5)：963-75，1995)研究了Src?SH3結構域的RT和n-Src環中突變的影響，并證實鄰近疏水表面的2個環中的突變會影響該結構域參與分子間和分子內結合的能力。

Hiipakka等人(″SH3domains?with?high?affinity?and?engineeredligand?specificities?targeted?to?HIV-1Nef.″J.Mol.Biol.293(5)：1097-106，1999)研究了Hck?SH3結構域的RT-環起通用的特異性和親和力決定子作用的能力。這些作者構建了Hck結構域的噬菌體文庫，其中隨機化RT-環的6個氨基酸(稱作RRT-SH3)。使用該策略，他們鑒別出可以為Hck-Sh3的最高達40倍地結合HIV-1?Nef的個別RRT-SH3結構域。這些作者指出RT環在SH3配體選擇中的重要性作為生成具有所需的結合性質的SH3結構域的一般策略。

Lee等人(″A?single?amino?acid?in?the?SH3domain?of?Hck?determinesits?high?affinity?and?specificity?in?binding?to?HIV-1Nef?protein.″Embo.J.14(20)：5006-15，1995)研究了對HIV-1Nef蛋白的Hck的不同SH3結合親和力和特異性的結構基礎，且能通過Fyn?SH3結構域的RT環中的單突變(R96I)將Hck?SH3對Nef的結合性質轉移至Fyn?SH3結構域。