[發明專利]一種抗氧化活性肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201310009321.3
• 申請日: 2013-01-11
• 公開（公告）號: CN103103242A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 廖丹葵;蔣海萍;孫建華;韋藤幼;童張法;趙鐘興
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16
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技術領域

本發明屬于功能食品領域，具體涉及海洋低值魚類藍圓鲹魚肉蛋白抗氧化活性肽及其制備方法。?

背景技術

常被作為食品添加劑的化學合成類抗氧化劑如丁羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)等由于其本身具有毒、副作用而被限制使用。天然抗氧化劑不僅能夠防止食品中油脂體系的氧化，而且可以防止人體內自由基的危害，延緩衰老及各種慢性退化性疾病如癌癥、冠心病、糖尿病等。介于蛋白質與氨基酸之間的肽類，由于其特殊的結構特點，高安全性及顯著的生物活性而被廣泛研究。近年來，人們已從多種動植物蛋白中分離得到了大量的天然抗氧化肽，其中動物性蛋白源抗氧化肽以水產抗氧化肽居多。而海洋生物種類繁多，數量龐大，且其蛋白質在氨基酸的組成及序列方面都與陸地生物蛋白有很大的不同，對其開發利用也日趨活躍。《水產科學》2008年第7期370-373頁報道了水解海洋蛋白如阿拉斯加青鱈、鯖魚、金槍魚等制備出高活性抗氧化肽。中國專利(ZL201010141974.3)公開了源自膠原蛋白的抗氧化肽及其用途，從膠原蛋白中分離得到了四個不同氨基酸序列的抗氧化肽，且能很好地應用于食品、化妝品、保健品等。?

藍圓鲹(Decapterus?maruadsi)，鱸形目鲹科圓鲹屬的一種。又稱池魚，巴浪魚等。分布于印度洋和太平洋，我國主產于南海、東海，是重要的經濟魚類之一。由于價格低、加工和回收手段落后，多制成咸干品或飼料魚粉使用，經濟效益低。近年來不少研究對其綜合利用進行了探討，如《食品研究與開發》2007年第12期、《食品工業科技》2008年第1期和《廣東海洋大學學報》2009年第4期均采用不同蛋白酶酶解藍圓鲹蛋白，分別以酶解產物中氮回收率、氨基氮的含量或多肽提取率為指標選擇最適蛋白酶為實驗用酶，并進行了酶解工藝條件考察。《食品科學》2009年第1期研究了溫度、pH值、食品中輔料及各種金屬離子對經Alcalase?2.4酶解的藍圓鲹抗氧化肽穩定性的影響。《中國釀造》2009年第9期與《食品研究與開發》2010年第2期分別選擇中性蛋白酶和堿性蛋白酶酶解藍圓鲹蛋白，并利用中心組合試驗方法優化酶解實驗條件。《中國食品學報》2012年第8期描述了響應曲面分析法優化?木瓜蛋白酶和風味蛋白酶水解藍圓鲹蛋白的水解工藝條件，并采用自由基清除率對水解產物的抗氧化活性進行研究。這些都只是涉及到酶解加工技術或產物抗氧化活性及其穩定性測定等方面，從藍圓鲹魚肉蛋白中分離純化出單一抗氧化活性肽的制備方法尚未見報道。?

發明內容

本發明提供源自海洋魚類藍圓鲹魚肉蛋白抗氧化活性肽及其制備方法，其特征在于以藍圓鲹魚肉蛋白為原料，采用枯草桿菌2709產生的堿性蛋白酶水解，經離心、超濾、凝膠層析、反相高效液相色譜多步分離并確定其中兩種天然抗氧化肽的結構。?

本發明具體實現步驟及條件如下：?

(1)將藍圓鲹魚肉蛋白粉與水混合調成蛋白含量為1～5wt％的反應原料液；然后加入0.002～0.05wt％堿性蛋白酶，在45～60℃及pH為7.5～10下水解3～6小時，最后加熱到100℃以終止酶解反應；?

(2)將步驟1)得到的酶解液于4℃、8000r/min離心10～15min，得到上清液并使用分子量為5000Da的超濾膜超濾分離收集滲透液；?

(3)以去離子水為流動相采用Sephedex?G-15凝膠層析柱分離步驟2)得到的超濾滲透液，并用蛋白核酸檢測儀于280nm處檢測并測定各峰對應的洗脫液的抗氧化活性，收集高活性的2號吸收峰(見圖1)組分并凍干；?