[發明專利]一種抗氧化活性肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201310009321.3
• 申請日: 2013-01-11
• 公開（公告）號: CN103103242A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 廖丹葵;蔣海萍;孫建華;韋藤幼;童張法;趙鐘興
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16
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1.一種制備藍圓鲹魚肉蛋白抗氧化活性肽的方法，其特征在于以藍圓鲹魚肉蛋白為原料，采用枯草芽孢桿菌2709所產生的堿性蛋白酶水解，具體工藝為：

(1)將藍圓鲹魚肉蛋白粉與水混合調成蛋白含量為1～5wt％的反應原料液，然后加入0.002～0.05wt％堿性蛋白酶，在45～60℃及pH為7.5～10下水解3～6小時，最后加熱至100℃滅酶得到酶解液；

(2)將酶解液于4℃、8000r/min離心10～15min，得到上清液并使用分子量為5000Da的超濾膜超濾分離收集滲透液；

(3)以去離子水為流動相采用Sephedex?G-15凝膠層析柱分離步驟2得到的滲透液，并用蛋白核酸檢測儀于280nm處檢測并測定各峰對應的洗脫液的抗氧化活性，收集高活性的2號吸收峰(見圖1)組分并凍干得到凍干體；

(4)將步驟3得到的凍干體用反相HPLC進一步分離，使用ODS柱(Hedera?ODS-C2，10×250mm)，采用含0.1％三氟乙酸的水和乙腈(0～25～60min內0～21～50％乙腈)為流動相線性洗脫，220nm波長下檢測洗脫峰并收集測定各峰抗氧化活性，流速1.5mL·min^-1，根據檢測譜圖(見圖2)收集活性最高的1號吸收峰對應的洗脫液；然后改用C18柱(Hypersil?ODS-C18，4.6×250mm)對1號吸收峰洗脫液進行再次純化，洗脫梯度為40min內0～20％乙腈，流速0.5mL·min^-1，根據檢測譜圖(見圖3)分別收集較高活性的1號和2號吸收峰對應的洗脫液并冷凍干燥，即得二個抗氧化肽。

2.權利要求1所述的藍圓鲹魚肉蛋白抗氧化活性肽，其氨基酸序列分別為His-Asp-His-Pro-Val-Cys(組氨酸-天冬氨酸-組氨酸-脯氨酸-纈氨酸-半胱氨酸)(其質譜見圖4)和His-Glu-Lys-Val-Cys(組氨酸-谷氨酸-賴氨酸-纈氨酸-半胱氨酸)(其質譜見圖5)。