[發(fā)明專利]一種用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310008125.4
• 申請(qǐng)日: 2013-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN103014118A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 檀軍;郭建軍;魏超;楊佳琪;李剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/02
• 分類號(hào): C12Q1/02
• 代理公司: 貴陽中新專利商標(biāo)事務(wù)所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

1.一種用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：將酶標(biāo)孔條拆分后放入6孔板中，將體積均為100ul，密度均為2×10⁴個(gè)/ml的癌細(xì)胞與正常細(xì)胞分別接種到每個(gè)獨(dú)立的酶標(biāo)孔中，待所有的細(xì)胞貼壁后，向各酶標(biāo)孔中加入10ul待測藥物，再向6孔板中加入DMEM培養(yǎng)液8ml，使酶標(biāo)孔浸沒在培養(yǎng)液中，共培養(yǎng)48h后，吸盡培養(yǎng)液，用MTT法、臺(tái)盼藍(lán)染色法、CCK-8法、形態(tài)學(xué)觀察法或hoechst染色法等進(jìn)行細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒或細(xì)胞凋亡檢測，從而實(shí)現(xiàn)抗癌藥物的篩選。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：將酶標(biāo)孔條進(jìn)行拆分前，先將酶標(biāo)孔在質(zhì)量百分比為75%的乙醇中浸泡1.5～2.5h，然后在生物安全柜中風(fēng)機(jī)開啟模式下吹1h，再在紫外線下照射1～1.5h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：將酶標(biāo)孔條進(jìn)行拆分前，在無菌條件下用明膠或100ug/ml多聚左旋賴氨酸包被酶標(biāo)孔。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的用明膠包被酶標(biāo)孔具體是指，將明膠溶解在超純水中，配制成0.2g/100ml的明膠溶液，待明膠完全溶解后，在溫度為121℃、壓力為100～110KPA的條件下，滅菌30min，將經(jīng)過高壓滅菌的明膠取出，獲得配制好的明膠；在無菌條件下向每個(gè)酶標(biāo)孔中加入15?ul配制好的明膠，將酶標(biāo)孔底全部覆蓋；再將包被了明膠的酶標(biāo)孔放入37℃的二氧化碳培養(yǎng)箱中1個(gè)小時(shí)后取出，最后用無菌PBS或超純水洗滌兩次，每次100ul，用于下一步接種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的用多聚賴氨酸包被酶標(biāo)孔具體是指，取分子量為15～30萬的多聚左旋賴氨酸，溶于PBS或超純水中，配成1mg/ml的儲(chǔ)存液，將儲(chǔ)存液過濾后置于-20℃冰箱中儲(chǔ)存，使用時(shí)將濃度稀釋至100ug/ml；然后在無菌條件下向每個(gè)酶標(biāo)孔中加入15微升100ug/ml的多聚左旋賴氨酸，將酶標(biāo)孔底全部覆蓋，再將包被了多聚左旋賴氨酸的酶標(biāo)孔放入37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中5個(gè)小時(shí)或過夜后取出，用無菌PBS或超純水洗滌兩次，用于下一步接種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的無菌PBS是，稱取1.6gNaCl、0.04gKCl、0.04gK?H₂PO₄、0.44gNa₂HPO₄·7H₂O，加入超純水，溶解并定容至200ml，高壓滅菌，在4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抗癌藥物篩選的細(xì)胞共培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的共培養(yǎng)是指用胰蛋白酶分別消化收集癌細(xì)胞與正常細(xì)胞，用倒置相差顯微鏡下計(jì)數(shù)，分別以2×10⁴個(gè)/ml的濃度接種到各酶標(biāo)孔中，每孔100ul，待細(xì)胞貼壁后分別加入10ul待測藥物，并以不加入藥物的有細(xì)胞培養(yǎng)液為無藥對(duì)照組，以無細(xì)胞的培養(yǎng)液為空白對(duì)照組，放入37℃二氧化碳濃度為5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)。