[發明專利]一種布拉氏酵母菌表面展示系統及其構建方法有效
| 申請號： | 201310007792.0 | 申請日： | 2013-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN103031329A | 公開（公告）日： | 2013-04-10 |
| 發明（設計）人： | 趙孝民;王甜甜;孫慧 | 申請（專利權）人： | 山東農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 271018 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 布拉氏 酵母菌 表面 展示 系統 及其 構建 方法 | ||
1.一種布拉氏酵母菌表面展示系統，其特征在于：該系統以pSP為基礎質粒,將AGA1基因，其基因序列如Seq?ID?No:8所示，AGA2基因表達核，其基因序列如Seq?ID?No:10所示，克隆到基礎質粒pSP上構建布拉氏酵母菌表面展示通用表達質粒pSDSb，該通用表達質粒含有在布拉氏酵母菌表面表達和表面展示的所有元件，異源蛋白與該通用質粒的Aga2p的C端融合從而表面展示在布拉氏酵母菌細胞壁上。
2.根據權利要求1所述的展示系統，其特征在于：表達質粒pSDSb轉化布拉氏酵母菌后，質粒中的Aga1p通過GPI錨定在細胞壁上，Aga2p的N端通過兩個二硫鍵與Aga1p連接，異源蛋白通過與Aga2p的C端融合從而表達展示在布拉氏酵母菌細胞壁上。
3.構建如權利要求1所述布拉氏酵母菌表面展示系統的方法，具體步驟為：
從布拉氏酵母菌的DNA組中擴增得到AGA1基因以及AGA2基因，并以pPIC9AGA2質粒為模板擴增AGA2基因表達核,用布拉氏酵母菌的AGA2基因替換AGA2基因表達核片段的AGA2基因；
將獲得的舶A1基因和替換后的AGA2基因表達核連接到基礎質粒pSP上，分別在超表達啟動子TEF1和PGK1控制之下，由此得到能夠在布拉氏酵母菌表面表達的通用表面展示表達質粒pSDSb，并將上述獲得的重組質粒轉化到布拉氏酵母菌即可獲得。
4.如權利要求1所述的布拉氏酵母菌表面展示系統作為活體酶催化劑或病原活疫苗載體的應用。
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