[發(fā)明專利]一種能特異結(jié)合河豚毒素的DNA適配子及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310007344.0
• 申請日: 2013-01-09
• 公開（公告）號: CN103045602A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵碧英;楊方;陳文炳;王云才;繆婷玉;彭娟
• 申請（專利權(quán)）人: 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種DNA適配子，其特征在于：所述適配子是應(yīng)用SELEX技術(shù)，從人工合成的全長為78個堿基的ssDNA文庫中篩選獲得的單鏈DNA，能特異結(jié)合河豚毒素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種DNA適配子，其特征在于：所述DNA適配子的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.如權(quán)利要求1所述的DNA適配子的應(yīng)用，其特征在于：將所述DNA適配子用于篩選檢測河豚毒素。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DNA適配子的應(yīng)用，其特征在于：將所述DNA適配子用于篩選檢測河豚毒素是采用DNA適配子-染料法，能在2小時內(nèi)快速篩選檢測河豚毒素。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的DNA適配子的應(yīng)用，其特征在于：DNA適配子-染料法的具體步驟如下：取5μL濃度為10pmol/L的DNA適配子的dsDNA于1.5mL離心管中，加入589μL?pH7.5的0.01mol/L磷酸緩沖液，再加入6μL河豚毒素待測樣品，同時以1%乙酸溶液代替河豚毒素待測樣品作為空白對照，室溫下孵育lh；孵育結(jié)束后，取孵育后的溶液198μL于酶標(biāo)微孔中，同時以0.01mol/L磷酸緩沖液作為背景信號對照，各加入2μL染料Eva?Green，充分結(jié)合10min后，用多功能酶標(biāo)儀于激發(fā)波長為485nm、發(fā)射波長為533nm處測定熒光強度值，當(dāng)對照溶液與待測樣品的熒光差值大于背景信號時，可判定為河豚毒素初篩陽性。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的DNA適配子的應(yīng)用，其特征在于：DNA適配子-染料直接法篩選檢測河豚毒素的檢出限為10^-6mo1/L，即為3.19×10^-4mg/mL。