[發明專利]一種檢測脂肪酶酶活的納米金比色法

有效

• 申請號: 201310007340.2
• 申請日: 2013-01-09
• 公開（公告）號: CN103076326A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 田丹碧;宋榮斌;黃和;江凌;鄒冰花
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

1.一種檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，使用納米金作為信號元件，同時以吐溫作為脂肪酶的底物兼納米金穩定劑。

2.根據權利要求1所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)采用檸檬酸鈉還原氯金酸制得酒紅色納米金溶液，

(2)向步驟（1）中得到的納米金溶液中加入吐溫溶液對納米金進行修飾；

(3)向修飾后的納米金溶液中加入氯化鈉溶液，使得經吐溫穩定的納米金處在鹽溶液中；

(4)向步驟（3）中得到的納米金溶液加入緩沖溶液進行pH的調節；后加入待測脂肪酶溶液，混勻，調節反應溫度，使納米金表面的吐溫被脂肪酶水解，納米金重新暴露到鹽溶液中發生聚集；對溶液進行檢測，得到不同時間對應的紫外可見光譜，然后以吸光度比值E₆₂₀/E₅₂₀作為縱坐標，時間為橫坐標，繪制脂肪酶酶活的動力學曲線。

3.根據權利要求1所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（1）中檸檬酸鈉還原法制備的納米金溶液的濃度為1.8-2.5?nmol/L，納米金的粒徑為13±2?nm。

4.根據權利要求3所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（1）中檸檬酸鈉還原法制備的納米金溶液的濃度為2?nmol/L，納米金的粒徑為13?nm。

5.根據權利要求1所述的檢脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（2）中吐溫溶液的濃度為3-6?mmol/L，吐溫溶液與納米金溶液的體積比為1:100-1:50，優選1:100。

6.根據權利要求1所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（2）中修飾時間為10-60?min，優選30min。

7.根據權利要求1所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（3）修飾后的納米金溶液中，氯化鈉的最終濃度為0.02-0.1mol/L，優選0.1?mol/L。

8.根據權利要求1所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（4）中，所述的緩沖液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液。

9.根據權利要求1所述的檢測脂肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟（4）中加入緩沖溶液將納米金溶液的pH值調至6-8，優選6.5。

10.根據權利要求1所述的檢測肪酶酶活的納米金比色法，其特征在于，所述步驟4中，反應溫度為30-60℃，優選50℃；加入的待測脂肪酶溶液的最終濃度為0.15-0.25?mg/ml，優選0.2?mg/ml。