[發(fā)明專利]一種棗樹試管苗誘變多倍體篩選的新方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310003965.1
• 申請日: 2013-01-06
• 公開（公告）號: CN103004607A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 齊向英;張向前;陳宗禮;陳國梁;薛皓;高朋濤
• 申請（專利權(quán)）人: 延安大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種棗樹試管苗誘變多倍體篩選的新方法，其特征在于，包括以下步驟：

①木棗試管苗誘變的基本程序；

②根據(jù)形態(tài)學(xué)特征對誘變后的植株進(jìn)行第一次篩選；

③分化培養(yǎng)對分化出的叢生芽進(jìn)行第二次篩選；

④對篩選的目標(biāo)叢生芽進(jìn)行染色體分析；

⑤對確定的多倍體進(jìn)行培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的該方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

⑴?在木棗試管苗繼代培養(yǎng)基中加入秋水仙堿溶液，滅菌冷卻后，在超凈工作臺上將帶莖尖棗樹試管苗接種在培養(yǎng)基上，每瓶培養(yǎng)基可以接種5~7株試管苗；在光照1?500?lx±200?lx，每天給12?h的光照、濕度70%±5%、溫度25±1℃條件下培養(yǎng)30d，完成誘變過程；

⑵?將第一步中的誘變過程完成的棗樹試管苗按每瓶一個(gè)芽體的方式轉(zhuǎn)接到不含秋水仙堿的新培養(yǎng)基中；

⑶?將低溫培養(yǎng)結(jié)束后的棗樹試管苗接種在以MS為基本培養(yǎng)基，pH?=6.0、附加瓊脂55g/L、蔗糖30g/L、6-A1.0mg/L、IBA0.2?mg/L、TDZ0.01?mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行連續(xù)分化培養(yǎng)；

⑷?將第三步獲得的叢生芽按葉片形態(tài)是否變皺褶、莖干是否變粗壯、葉間距是否變短對其進(jìn)行篩選。篩選后的植株再按單芽體進(jìn)行?培養(yǎng)；

⑸?對經(jīng)過再次培養(yǎng)的疑是多倍體進(jìn)行染色體壓片觀察，確認(rèn)其是否是多倍體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的該方法，其特征在于，在木棗試管苗繼代培養(yǎng)基中加入30%的秋水仙堿溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的該方法，其特征在于，?MS培養(yǎng)基為：NH₄NO₃?1650mg/L；KNO₃　1?900?mg/L；?CaCl₂·2H₂O?440?mg/L；MgSO?₄·7H₂O?370?mg/L；KH₂PO₄?170?mg/L；KI?0.83?mg/L；H₃BO₃?6.2?mg/L；MnSO₄·4H₂O?22.3?mg/L；ZnSO₄·7H₂O?8.6?mg/L；Na₂MnO₄·2H₂O?0.25?mg/L；CuSO₄·5H₂O?0.025?mg/L；CoCl₂·6H₂O?0.025?mg/L；FeSO₄·7H₂O??27.8?mg/L；Na₂-EDTA·2H?₂O?37.3?mg/L；　　有機(jī)物質(zhì)：?肌醇?100?mg/L；煙酸?0.5?mg/L；鹽酸吡哆醇??0.5?mg/L；鹽酸硫胺素?0.1?mg/L；甘氨酸?2.0?mg/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的該方法，其特征在于，?將低溫培養(yǎng)結(jié)束后的棗樹試管苗接種在以MS為基本培養(yǎng)基，pH?=6.0、附加瓊脂55g/L、蔗糖30g/L、6-A1.0mg/L、IBA0.2?mg/L、TDZ0.01?mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行連續(xù)分化培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：光照1?500?lx±200?lx，每天給12?h的光照、濕度70%±5%、溫度25±1℃條件下培養(yǎng)；直到分化出不同形態(tài)的叢生芽。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的該方法，其特征在于，所用來篩選多倍體的木棗芽體為誘變后的試管苗單個(gè)芽體分化出的新芽體。?