[發明專利]一種魚類鮮度K值測定樣品前處理方法

有效

• 申請號: 201310003397.5
• 申請日: 2013-01-06
• 公開（公告）號: CN103033581A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 胡亞芹;劉東紅;陳士國;葉興乾;陳健初;張佳琪;丁甜;吳丹
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明涉及分析測試技術領域，尤其涉及一種改進的魚類鮮度K值測定樣品前處理方法。

背景技術

鮮度是水產品價值的重要衡量指標。K值是表示鮮度的一個指標，自1959年提出這個概念后，測定K值所需的提取ATP關聯化合物的方法卻沒有很大改進。

魚死亡早期，其自身的酶活性仍在活動，魚的早期鮮度取決于自身的生物化學反應。將肌苷和次黃嘌嶺之和對ATP?各級降鮮產物之和的比值即K值作為評定魚類鮮度的重要化學指標，該法對魚類鮮度進行評定行之有效，目前已為世界各國采用。測定的關鍵在于對魚肉樣品中所含核苷酸不同階段的分解物進行定量。而核苷酸及其分解產物的提取是否充分，提取過程是否迅速高效，對K值的測定精度具有極大的影響。

傳統的樣品處理方法是將魚肉在高氯酸中勻漿，使得與ATP及其關聯產物分解相關的酶失活，同時抽提出酸可溶性核苷酸分解產物。離心分離上清液，沉淀多次重復抽提，最后合并上清液。為防止ATP在酸性條件下分解，抽提出的上清液應盡快用KOH中和。另外，采用KOH中和還能除去高氯酸，避免其阻礙ATP關聯產物在后續離子交換樹脂的吸附。以上操作，步驟較多，處理不便，多個步驟必然造成系統誤差，導致測定精度的低下；且處理時間長，有可能導致ATP關聯產物的非生理性分解，導致測定誤差。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種改進的魚類鮮度K值測定樣品前處理方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：一種魚類鮮度K值測定樣品前處理方法，包括以下步驟：

（1）取0.8-1.2g魚肉樣品，放入容器中，添加質量濃度為2.5-10%的高氯酸的水溶液，魚肉樣品與高氯酸的水溶液的質量體積比為0.1（g/mL），在冰水浴條件下攪拌10-20分鐘；

（2）往容器中添加濃度為1M的KOH，調節pH值至2-3.5；

（3）加蒸餾水或去離子水定容至20mL，通過0.45微米的微濾膜過濾除去可能含有的雜質。在濾液中添加0.2-1mL的濃度為0.1M、pH為7.5的磷酸緩沖液，即得到K值分析用的預處理樣品。

本發明的有益效果是，本發明的方法簡單易行，省時省力，降低對儀器的依賴，提高了處理效率，確保測定精度。

具體實施方式

一種魚類鮮度K值測定樣品前處理方法，包括以下步驟：

1、取0.8-1.2g魚肉樣品，放入容器中，添加質量濃度為2.5-10%的高氯酸的水溶液，魚肉樣品與高氯酸的水溶液的質量體積比為0.1（g/mL），在冰水浴條件下攪拌10-20分鐘。

高氯酸可使魚肉中含有的ATP及其關聯產物分解酶類失活，傳統方法為提高ATP及其關聯產物的提取得率，采用勻漿的方法使得魚肉微細化。但是，附聚在勻漿機器件及容器皿上的樣品收集比較困難；樣本較多時，勻漿處理亦耗時耗力。研究發現，若樣品為0.8-1.2g，無論是直接在魚肉中添加高氯酸，還是把魚肉樣品切成若干小塊，或者經過細致均勻的剁碎，添加高氯酸水溶液后抽提出的核苷酸關聯物的量測定結果沒有明顯的差異。故本發明略去細切、剁碎、勻漿的操作，直接在0.8-1.2g魚肉樣品中添加高氯酸，以玻璃棒攪拌，提取10-20分鐘。

傳統方法為確保ATP及其關聯產物的提取得率，至少重復抽提2次以上，即通過離心分離，將上清液轉移到其他容器中，所得沉淀繼續添加高氯酸勻漿后再離心，棄去沉淀，合并上清液。研究發現，一次提取所得上清液中ATP及其關聯產物的得率最高，重復抽提液中亦能測定到很低含量的產物。考慮傳統方法中經離心分離操作，這些少量可測定產物很可能是附著在離心管壁上的殘留物。另外，提取時間從5分鐘到30分鐘，所得結果大致相同。本發明結合后續步驟，省略多次離心轉移容器的操作，采用1次高氯酸提取10-20分鐘，無需離心，保留沉淀，直接進入后續的中和操作。

2、往容器中添加濃度為1M的KOH，調節pH值至2-3.5。