[發明專利]一種釀酒酵母整合型表達載體

有效

• 申請號: 201310003066.1
• 申請日: 2013-01-05
• 公開（公告）號: CN103911371A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 賀鵬;張新杰;陶勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/81;C12R1/865
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種雙鏈DNA片段，自上游至下游依次包括如下元件：釀酒酵母染色體上游同源臂、真核啟動子、釀酒酵母的IRES序列、真核篩選基因、真核轉錄終止序列和釀酒酵母染色體下游同源臂。

2.如權利要求1所述的雙鏈DNA片段，其特征在于：所述釀酒酵母染色體上游同源臂為釀酒酵母染色體上的18SrDNA的上游同源臂，所述釀酒酵母染色體下游同源臂為釀酒酵母染色體上的18SrDNA的下游同源臂。

3.如權利要求2所述的雙鏈DNA片段，其特征在于：所述“釀酒酵母染色體上的18SrDNA的上游同源臂”如序列表的序列1自5’末端第675至1007位核苷酸所示，所述“釀酒酵母染色體上的18SrDNA的下游同源臂”如序列表的序列1自5’末端第3558至3921位核苷酸所示。

4.如權利要求1至3中任一所述的雙鏈DNA片段，其特征在于：所述真核啟動子為釀酒酵母的啟動子、所述真核轉錄終止序列為釀酒酵母的轉錄終止序列。

5.如權利要求4所述的雙鏈DNA片段，其特征在于：所述釀酒酵母的啟動子為釀酒酵母的ILV5基因啟動子、釀酒酵母的TDH3基因啟動子或釀酒酵母的ADH2基因啟動子；所述釀酒酵母的轉錄終止序列為釀酒酵母的URA3基因轉錄終止序列。

6.一種質粒，包括真核元件組；所述真核元件組為權利要求1至5中任一所述的雙鏈DNA片段。

7.如權利要求6所述的質粒，其特征在于：所述質粒還包括原核元件組；所述原核元件組自上游至下游依次包括如下組件：原核復制起點和原核篩選基因。

8.權利要求1至5中任一所述的雙鏈DNA分子或權利要求6或7所述的質粒在制備蛋白中的應用。

9.一種制備蛋白的方法，是將目的蛋白的編碼基因插入權利要求1至5中任一所述雙鏈DNA分子的所述真核啟動子和所述釀酒酵母的IRES序列之間，得到融合DNA分子，將所述得到融合DNA分子導入酵母菌株并培養所述酵母菌株，得到所述目的蛋白。

10.一種制備蛋白的方法，是將目的蛋白的編碼基因插入權利要求6或7所述重組質粒的所述真核啟動子和所述釀酒酵母的IRES序列之間，得到重組質粒，獲得所述重組質粒中的融合DNA分子，將所述融合DNA分子導入酵母菌株并培養所述酵母菌株，得到所述目的蛋白；所述融合DNA分子為將所述目的蛋白的編碼基因插入所述真核元件組的所述真核啟動子和所述釀酒酵母的IRES序列之間得到的DNA分子。