[發(fā)明專利]一種重組豬釉原蛋白及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310002602.6
• 申請日: 2013-01-05
• 公開（公告）號: CN103014050A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 束蓉;程嵐;李希庭;林智愷;宋忠臣
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/47;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 劉懿

1.一種重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，合成全長豬釉原蛋白基因；

步驟2，構(gòu)建含有上述基因的重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-pAm；

步驟3，將步驟2獲得的重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-pAm轉(zhuǎn)化菌株E.coli.?BL21；

步驟4，誘導(dǎo)步驟3獲得的重組菌株表達(dá)融合蛋白GST-pAm；

步驟5，切除步驟4獲得的融合蛋白GST-pAm的GST標(biāo)簽蛋白，獲得重組豬釉原蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟1中所述全長豬釉原蛋白基因的堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，在步驟2中，構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-pAm采用內(nèi)切酶ECoRⅠ和SalⅠ，酶切引物分別為5’-CCGGAATTCATGCCTCTACCACCTCATCCTG-3’和5’-ACGCG?TCGACTTAATCCACTTCCTCCCGCTTG-3’。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟4中，通過異丙基硫代-β-D半乳糖苷誘導(dǎo)步驟3獲得的重組菌株表達(dá)融合蛋白GST-pAm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟5為：純化步驟4獲得的融合蛋白GST-pAm，切除GST標(biāo)簽蛋白，獲得純化的重組豬釉原蛋白pAm。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟4獲得的融合蛋白GST-pAm通過GST親和層析純化。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的重組豬釉原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟5中切除GST標(biāo)簽蛋白采用凝血酶。

8.一種如權(quán)利要求1所述方法制備的重組豬釉原蛋白。

9.一種含有全長豬釉原蛋白基因的重組原核表達(dá)載體，其特征在于，在原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1中包含有SEQ?ID?NO.1核苷酸序列。

10.一種由權(quán)利要求9所述重組原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株。