[發明專利]龍膽瀉肝顆粒有效成分的綜合檢測方法

無效

• 申請號: 201310000218.2
• 申請日: 2013-01-01
• 公開（公告）號: CN103063799A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 殷金龍;高艷輝;李坤;徐德輝;馬偉才;楊錫龍;李男男;樊艷霞;李雪;寧超群
• 申請（專利權）人: 吉林紫鑫藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/02
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

1.一種龍膽瀉肝顆粒有效成分的檢測方法，包括梔子的鑒別方法：

取本品龍膽瀉肝顆粒12g，加水30ml，加熱使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15ml，棄去乙醚液，再用水飽合的正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，加等體積氨試液，搖勻，放置分層，分取上清液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI?B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：丙酮：甲酸：水=5：5：1：1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在110℃烘10分鐘，至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

其特征在于還包括如下的鑒別方法和含量測定方法和檢查方法：

（一）鑒別方法

（1）取本品龍膽瀉肝顆粒12g，研細，加甲醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml，加熱使溶解，放冷，用水飽合正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI?B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯：丁酮：甲酸：水=5：3：1.1：1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（2）取上述（1）項下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材2g，加甲醇20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ?B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水=15：1：1：2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（3）取上述（1）項下的供試品溶液，加于已處理好的中性氧化鋁柱上，所裝中性氧化鋁120目，2g，柱內徑15mm，用甲醇20ml洗脫，洗脫液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI?B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以氯仿：甲醇：水=13：6：2，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（二）含量測定方法

（1）照中國藥典2005年版一部附錄VI?D高效液相色譜法測定；

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇：水=20:80為流動相；檢測波長為270nm；理論板數按龍膽苦苷峰計算應不低于3000；

對照品溶液的制備：取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，研細，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率為250W，頻率為50kHz，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，混勻，濾過，取續濾液，即得；

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；

（2）對照品溶液的制備：精密稱取在60℃減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含60μl的溶液，即得；

供試品溶液制備：取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，充分研細，取1.5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%甲醇45ml，超聲處理，?30分鐘，功率150W，頻率25KHz，放冷至室溫，加60%甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液，即得；

照中國藥典2005年版一部附錄VI?D高效液相色譜法測定；

色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇：水：磷酸=47：53：0.2為流動相；檢測波長為280nm；理論板數按黃芩苷峰計算，應不低于2500；

測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜液，測定，即得；

（3）對照品溶液的制備：取梔子苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，充分研細，取1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，功率為300W，頻率為50kHz，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續濾液10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

照中國藥典2005年版一部附錄VI?D高效液相色譜法測定；

色譜條件與系統適用性試驗?：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：水=11:89為流動相；檢測波長為238nm，理論板數按梔子苷峰計算應不低于2000；

測定法??分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；

（4）照中國藥典2005年版一部附錄VI?D高效液相色譜法測定；

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇：0.2mol/L醋酸銨溶液：冰醋酸=67：33：1為流動相；檢測波長為250nm；理論板數按甘草酸峰計算應不低于2000；

對照品溶液的制備：取甘草酸銨對照品10mg，精密稱定，加0.5%氨溶液：甲醇=1:1的混合溶液制成每1ml含0.2mg的溶液，相當于每1ml含甘草酸0.1959mg，即得；

供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，研細，取1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.5%氨溶液：甲醇=1:1的混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率為250W，頻率為20kHz，放冷，再稱定重量，用上述混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

測定法??分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；

???（三）檢查方法：

照中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ?D高效液相色譜法測定；

色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇：水：冰醋酸=57：43：1為流動相；檢測波長為317nm，理論塔板數按馬兜鈴酸A峰計算應不低于8000；

對照品溶液的制備：精密稱取馬兜鈴酸A對照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取0.5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，每1ml含馬兜鈴酸A為1μg；

????供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，混勻，研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇：甲酸=98:2，50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率40kHz，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液10ml，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用10％的鹽酸溶液調pH值2－3，用乙醚提取4次，每次10ml，合并乙醚提取液，置60℃水浴上揮干，殘渣加少量甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得;

測定法:?分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。