[發明專利]通過抑制MyD88/Erk MAP激酶相互作用的癌癥治療

有效

• 申請號: 201280069559.9
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN104185789A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: A.克福里;I.科斯特-英弗尼齊;S.萊比庫;T.倫諾
• 申請（專利權）人: 利昂貝拉爾中心;克勞德伯納德里昂第一大學;里昂公立收容所;國家健康和醫學研究院(INSERM);國家科學研究中心
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/573
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 劉國軍

本發明涉及鑒定用于癌癥治療的新穎化合物的方法及抑制MyD88/Erk?MAP激酶相互作用以治療癌癥的化合物。

已經完善建立的是炎癥起致癌作用的促進者作用。因此，MyD88(TLR信號傳導途徑的一種接頭蛋白)由于其在炎癥中的作用而涉及致癌作用。

現在本發明令人驚奇地表明，MyD88在體外和體內在ras依賴性致癌作用中發揮固有作用。具體地，MyD88通過保守基序結合ERK?MAP激酶，因此阻斷其特異性磷酸酶MKP3對ERK的失活，并導致ras規范途徑活性的放大。證實在人類癌癥中這種機制的關聯性，在許多人類癌癥中MyD88表現為過表達并與磷酸-ERK相關。此外，實驗數據表明MyD88直接參與ras信號傳導途徑和由這一癌基因誘導的惡性轉化。

MyD88/Erk?MAP激酶相互作用抑制劑在腫瘤細胞中誘導凋亡。有趣的是，在MyD88/Erk?MAP激酶的抑制劑和誘導DNA損傷的化療劑之間觀察到協同效應。因此，本發明對癌癥提供了新的治療前景，其中，第一線治療是基于誘導DNA損傷的化療劑。誘導DNA損傷的化療劑與抑制MyD88/Erk?MAP激酶相互作用的結合在敏感性腫瘤中實現劑量降低，因此增加患者的耐受性或在具有高效DNA修復機制的耐受性癌細胞株中再誘導敏感性。

發明內容

1)本發明涉及一種用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，包括以下步驟：

a)提供至少一種候選化合物；

b)在適于允許ERK?MAPK和MyD88在不存在候選分子的情況下相互作用的條件下，將至少一種候選化合物與ERK?MAPK蛋白和MyD88蛋白接觸；

c)確定在存在和不存在至少一種候選化合物的情況下所測量的ERK?MAPK和MyD88的相互作用；和

d)選擇抑制ERK?MAPK和MyD88相互作用的候選化合物。

2)根據1的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中ERK?MAPK和MyD88中的一種或兩種與可檢測標記物附接。

3)根據1-2中任一項的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中使用雙雜交系統、親和層析、共免疫沉淀、大分子復合物的亞細胞分級和分離、免疫印跡、免疫標記、鄰近連接測定法(proximity?ligation?assay)、免疫沉淀測定法、Biacore測定法或GST下拉(pull-down)測定法確定ERK?MAPK和MyD88的相互作用。

4)根據1-3中任一項的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述誘導DNA損傷的化療劑選自奧沙利鉑(oxaliplatin)、順鉑、卡鉑、多柔比星、依托泊苷、博來霉素(bleomycin)及其混合物。

5)根據1-4中任一項的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述癌癥選自：結腸直腸癌、腸癌、黑素瘤、肺癌和宮頸癌。

6)用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，包括以下步驟：

a)提供至少一種候選化合物；

b)提供在誘導型啟動子控制下穩定表達MyD88和在選自SRE啟動子、ELK啟動子和MyC啟動子的來自MAPK途徑的啟動子控制下表達報告基因的轉化細胞；

c)在至少一種候選化合物的存在下，在所述轉化細胞中誘導MYD88的過表達；

d)測量所述報告基因的表達并選擇至少一種抑制所述報告基因表達的候選化合物；

e)提供通過轉染MyD88和Myc癌基因轉化的永生化成纖維細胞；

f)監測在步驟d)中選擇的至少一種候選化合物的存在下，和在至少一種誘導DNA損傷的化療劑的存在下的集落形成，并選擇增強誘導DNA損傷的化療劑對集落形成的抑制效果的候選化合物。

7)根據6的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的方法，其中步驟b)中MAPK途徑的啟動子是SRE啟動子。

8)根據6-7中任一項的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述方法還包括以下步驟：

-提供在誘導型啟動子控制下穩定表達MyD88和在選自Nf-kB啟動子和ISRE啟動子的來自炎癥途徑的啟動子控制下表達報告基因的轉化細胞；

-在至少一種候選化合物的存在下，在所述轉化細胞中誘導MYD88的過表達；