[發(fā)明專利]通過抑制MyD88/Erk MAP激酶相互作用的癌癥治療

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280069559.9
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN104185789A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設計）人: A.克福里;I.科斯特-英弗尼齊;S.萊比庫;T.倫諾
• 申請（專利權）人: 利昂貝拉爾中心;克勞德伯納德里昂第一大學;里昂公立收容所;國家健康和醫(yī)學研究院(INSERM);國家科學研究中心
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/573
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 劉國軍

1.一種用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，包括以下步驟：

a)提供至少一種候選化合物；

b)在適于允許ERK?MAPK蛋白和MyD88蛋白在不存在候選分子的情況下相互作用的條件下，將至少一種候選化合物與ERK?MAPK蛋白和MyD88蛋白接觸；

c)確定在存在和不存在至少一種候選化合物的情況下所測量的ERK?MAPK和MyD88的相互作用；和

d)選擇抑制ERK?MAPK和MyD88相互作用的候選化合物。

2.根據(jù)權利要求1所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中ERK?MAPK和MyD88中的一種或兩種與可檢測標記物附接。

3.根據(jù)權利要求1-2中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中使用雙雜交系統(tǒng)、親和層析、共免疫沉淀、大分子復合物的亞細胞分級和分離、免疫印跡、免疫標記，鄰近連接測定法、免疫沉淀測定法、Biacore測定法或GST下拉測定法確定ERK?MAPK和MyD88的相互作用。

4.根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述誘導DNA損傷的化療劑選自：奧沙利鉑、順鉑、卡鉑、多柔比星、依托泊苷、博來霉素及其混合物。

5.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述癌癥選自：結(jié)腸直腸癌、腸癌、黑素瘤、肺癌和宮頸癌。

6.用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，包括以下步驟：

a)提供至少一種候選化合物；

b)提供在誘導型啟動子控制下穩(wěn)定表達MyD88和在選自SRE啟動子、ELK啟動子和MyC啟動子的來自MAPK途徑的啟動子控制下表達報告基因的轉(zhuǎn)化細胞；

c)在至少一種候選化合物的存在下，在所述轉(zhuǎn)化細胞中誘導MYD88的過表達；

d)測量所述報告基因的表達并選擇至少一種抑制所述報告基因表達的候選化合物；

e)提供通過轉(zhuǎn)染MyD88和Myc癌基因轉(zhuǎn)化的永生化成纖維細胞；

f)監(jiān)測在步驟d)中選擇的至少一種候選化合物的存在下，和在至少一種誘導DNA損傷的化療劑的存在下的集落形成，并選擇增強誘導DNA損傷的化療劑對集落形成的抑制效果的候選化合物。

7.根據(jù)權利要求6所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中在步驟b)中，所述來自MAPK途徑的啟動子是SRE啟動子。

8.根據(jù)權利要求6-7中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述方法還包括以下步驟：

-提供在誘導型啟動子控制下穩(wěn)定表達MyD88和在選自Nf-kB啟動子和ISRE啟動子的來自炎癥途徑的啟動子控制下表達報告基因的轉(zhuǎn)化細胞；

-在至少一種候選化合物的存在下，在所述轉(zhuǎn)化細胞中誘導MYD88的過表達；

-測量所述報告基因的表達并選擇不抑制所述報告基因表達的候選化合物。

9.根據(jù)權利要求8所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述來自炎癥途徑的啟動子是Nf-kB。

10.根據(jù)權利要求6-9中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中在步驟b)中，所述細胞選自HCT116細胞系、A375細胞系和HeLa細胞系。

11.根據(jù)權利要求6-10中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述誘導型啟動子是抗生素誘導型啟動子。

12.根據(jù)權利要求6-11中任一項所述的用于體外選擇能夠增強誘導DNA損傷的化療劑治療癌癥的效果的化合物的方法，其中所述永生化成纖維細胞是NIH3T3永生化成纖維細胞。