[發(fā)明專利]T細胞受體基因修飾小鼠

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280064216.3
• 申請日: 2012-10-26
• 公開（公告）號: CN104011071B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設計）人: L·麥克唐納;A·J·莫菲;J·麥克沃克;N·圖;V·沃羅寧那;C·古雷爾;K·梅格爾;S·史蒂文斯
• 申請（專利權(quán)）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;A01K67/027
• 代理公司: 北京商專永信知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)11400
• 代理人: 鄔玥,葛強

相關申請的交叉引用

本申請要求美國臨時申請?zhí)?1/552,582，申請日為2011年10月28日；美國臨時申請?zhí)?1/621,198，申請日為2012年4月6日和美國臨時申請?zhí)?1/700,908，申請日為2012年9月14日的優(yōu)先權(quán)，其全部內(nèi)容通過引用并入本申請。

發(fā)明領域

本發(fā)明涉及基因修飾的非人動物例如嚙齒動物(例如小鼠或大鼠)，在所述動物的基因組中包含人源或人源化的T細胞受體(TCR)可變基因基因座(例如TCRα和TCRβ可變基因基因座和/或TCRδ和TCRγ可變基因基因座)，并且表達來自人源或人源化的TCR可變基因基因座的人源或人源化的TCR多肽(例如TCRα和TCRβ多肽和/或TCRδ和TCRγ多肽)。具有本發(fā)明的人源或人源化的TCR可變基因基因座的非人動物在內(nèi)源性非人源TCR基因座包含未經(jīng)重排的人源TCR可變區(qū)基因區(qū)段(例如V、D和/或J區(qū)段)。本發(fā)明還涉及胚胎、組織和細胞(例如T細胞)，其包含人源或人源化的TCR可變基因基因座并且表達人源或人源化的TCR多肽。本申請還提供了制備包含人源或人源化的TCR可變基因基因座的基因修飾非人動物的方法；以及使用包含人源或人源化的TCR可變基因基因座并且表達來自這些基因座的人源或人源化的TCR多肽的非人動物、胚胎、組織和細胞的方法。

發(fā)明背景

在適應性免疫應答中，通過B淋巴細胞(例如免疫球蛋白)和T淋巴細胞(例如T細胞受體或TCR)上的受體分子識別外來抗原。血液和細胞外空間中的病原體是在體液免疫應答過程中由抗體識別的，而在細胞內(nèi)對病原體的破壞是在細胞免疫應答過程中由T細胞介導的。

T細胞識別并攻擊在主要組織相容性復合物(MHC)背景下遞呈至細胞表面上的抗原。抗原識別由T細胞表面上表達的TCR介導。有兩大類T細胞具有這種功能：細胞毒性T細胞，其表達細胞表面蛋白CD8，和輔助T細胞，其表達細胞表面蛋白CD4。細胞毒性T細胞活化信號級聯(lián)導致遞呈該抗原的細胞被直接破壞(在MHC I背景下)，而輔助T細胞分化成幾種類型，并且其活化(在MHC II背景下通過識別遞呈的抗原而激發(fā))導致巨噬細胞介導的病原體破壞和刺激B細胞產(chǎn)生抗體。

由于其具有抗原特異性，因而目前對抗體針對多種人類疾病的治療潛力進行了廣泛研究。為生成能夠中和人類靶點的抗體，但避免同時激活針對這種抗體的免疫應答，科學家們集中精力在生產(chǎn)人源或人源化的免疫球蛋白上。在體內(nèi)生產(chǎn)人源化的抗體的一種方法是使用小鼠，這種人源化小鼠包含(1)彼此之間可操作地連接的未經(jīng)重排的人源免疫球蛋白V、D和J區(qū)段庫，所述區(qū)段庫和小鼠恒定區(qū)位于內(nèi)源性小鼠免疫球蛋白重鏈基因座，以及(2)彼此之間可操作地連接的未經(jīng)重排的人源Vκ和Jκ區(qū)段庫，所述區(qū)段庫和小鼠恒定κ區(qū)位于內(nèi)源性小鼠免疫球蛋白κ輕鏈基因座。這樣，小鼠提供了用于工程化制備人源抗體的高度多樣化的重排抗體可變結(jié)構(gòu)域的豐富來源。

與抗體類似，T細胞受體包含可變區(qū)，其由包含V(D)J可變區(qū)區(qū)段的未經(jīng)重排的基因座(α和β基因座，或者δ和γ基因座)編碼，并且該可變區(qū)賦予了T細胞抗原結(jié)合特異性。亦與抗體類似，TCR對其抗原的特異性能夠用于開發(fā)新療法。因此，在本領域中需要非人動物(例如嚙齒動物，例如大鼠或小鼠)，所述動物包含能夠重排以形成編碼人源T細胞受體可變結(jié)構(gòu)域基因的未經(jīng)重排的人源T細胞可變區(qū)基因區(qū)段，包括彼此間同源的結(jié)構(gòu)域和與目的抗原特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。還需要一種包含T細胞可變區(qū)基因座的非人動物，所述基因座包含保守的人源化，其包括包含未經(jīng)重排的人源基因區(qū)段的非人動物，所述人源基因區(qū)段能夠重排以形成與非人源(內(nèi)源性)T細胞受體恒定基因序列連接的T細胞受體可變區(qū)基因。還需要能夠生成多樣性的人源T細胞受體可變序列庫的非人動物。需要在對目的抗原應答時能夠重排大部分或全部功能性T細胞受體可變區(qū)區(qū)段以形成包含完全人源可變結(jié)構(gòu)域的T細胞受體多肽的非人動物。

發(fā)明概述

本申請?zhí)峁┝朔侨藙游锢鐕X動物，所述動物包含表達在細胞免疫應答中具有功能的人源化的分子的非人源細胞。本申請還提供了包含未經(jīng)重排的TCR可變基因基因座的非人動物。本申請?zhí)峁┝梭w內(nèi)和體外系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含人源化的嚙齒動物細胞，其中所述嚙齒動物細胞表達一種或多種人源化的免疫系統(tǒng)分子。本申請還提供了編碼人源化的TCR蛋白的未經(jīng)重排的人源化的TCR嚙齒動物基因座。